發(fā)布時(shí)間：2021-02-07 11:12

　　為了建立塞內(nèi)卡病毒A（SVA）血清學(xué)診斷方法,本研究體外融合表達(dá)結(jié)構(gòu)蛋白VP2和VP3全長(zhǎng),并建立了間接ELISA方法,并利用建立的方法,進(jìn)一步研究了多次感染SVA后VP2/3抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。本研究首先從塞內(nèi)卡GD01/2017株中擴(kuò)增出VP2和VP3基因,將其克隆至表達(dá)載體pET-30a,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,經(jīng)檢測(cè)蛋白以包涵體形式存在。大量誘導(dǎo)表達(dá)后收集純化包涵體蛋白,用6 mol/L鹽酸胍溶解包涵體并測(cè)定其濃度為5.3 mg/mL,利用該蛋白建立了SVA結(jié)構(gòu)蛋白VP2/3的間接ELISA檢測(cè)方法。本研究進(jìn)一步利用該ELISA方法檢測(cè)SVA GD01/2017株多次感染SPF豬后的血清樣品,繪制了VP2/3抗體的消長(zhǎng)規(guī)律圖,為后續(xù)疫苗免疫程序的制定奠定基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2020,56(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

純化的包涵體蛋白的SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果

最佳封閉液的確定

最佳兔抗豬HRP酶標(biāo)二抗稀釋度的確定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]塞內(nèi)卡病毒A的RT-PCR檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用[J]. 范慧,李亮,姜平,王先煒,李玉峰,白娟.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(06)
[2]塞內(nèi)卡病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 王淑娟,王東方,趙月龍,謝彩華,趙雪麗,馬震原,王華俊,楊朋霞,閆若潛.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(05)
[3]A型塞內(nèi)卡病毒VP2蛋白原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備[J]. 張永寧,張舟,諸明欣,梅琳,王彩霞,吳紹強(qiáng),林祥梅.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2019(01)
[4]塞內(nèi)卡谷病毒熒光RT-RPA快速檢測(cè)方法的建立[J]. 林彥星,曹琛福,花群俊,黃超華,楊俊興,徐錚,史衛(wèi)軍,阮周曦,花群義.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2018(12)
[5]塞內(nèi)卡病毒病研究進(jìn)展[J]. 張永寧,吳紹強(qiáng),林祥梅.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(08)

碩士論文
[1]豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的原核表達(dá)純化及其多克隆抗體的制備[D]. 高斌.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3022136