目前還未見DPV UL17基因功能研究的報道,本論文對DPV-CHv株的UL17基因（由本實(shí)驗(yàn)室注冊,GenBank登錄號EF643567）進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,根據(jù)分析結(jié)果設(shè)計實(shí)驗(yàn),對UL17基因進(jìn)行原核表達(dá)、多克隆抗體制備、轉(zhuǎn)錄表達(dá)時相分析及UL17蛋白與UL25蛋白、UL26.5蛋白的細(xì)胞共定位研究,結(jié)果如下：1. DPV-UL17基因的生物信息學(xué)分析生物信息學(xué)方法分析DPV-UL17基因,結(jié)果表明UL17基因編碼蛋白分子量為75.94298 kDa,由684個氨基酸組成,無信號肽位點(diǎn)及跨膜區(qū)。同時該蛋白含19個磷酸化位點(diǎn)、4個糖基化位點(diǎn)和多個抗原表位,預(yù)測其主要定位在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。2. DPV-UL17基因克隆表達(dá)、蛋白純化和多克隆抗體制備根據(jù)DPV UL17基因序列,用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計出一對特異性引物,并將擴(kuò)增的UL17全基因克隆入pMD20-T載體中,先后經(jīng)Xhol和BamHI?酶切后,克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a （+）中,成功構(gòu)建了pET32a-UL17重組原核表達(dá)質(zhì)粒。之后轉(zhuǎn)化到BL21（DE3）表達(dá)宿主菌,表達(dá)的重組蛋白大小約為96... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
一、引言
    1 文獻(xiàn)綜述
        1.1 UL17基因序列的特點(diǎn)
        1.2 UL17編碼蛋白的特點(diǎn)
        1.3 皰疹病毒UL17蛋白的功能
            1.3.1 DNA切割和組裝
            1.3.2 衣殼在細(xì)胞內(nèi)的正常分布
            1.3.3 UL17蛋白與UL25蛋白復(fù)合體的作用
            1.3.4 UL17蛋白與其它蛋白的相互作用
    2 選題目的和意義
二、試驗(yàn)研究
    1 材料
        1.1 試驗(yàn)動物
        1.2 基因、載體、毒株、菌株
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 主要試劑
    2 方法
        2.1 生物信息學(xué)分析
        2.2 鴨瘟病毒UL17基因克隆表達(dá)、多克隆抗體制備
            2.2.1 引物合成和稀釋
            2.2.2 DPV UL17基因擴(kuò)增
            2.2.3 DPV UL17基因T克隆
            2.2.4 DPV UL17基因T克隆鑒定
            2.2.5 構(gòu)建pET32a-UL17重組原核表達(dá)質(zhì)粒
            2.2.6 pET32a-UL17重組原核表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)
            2.2.7 檢測重組UL17蛋白的反應(yīng)原性
            2.2.8 重組UL17蛋白的純化
            2.2.9 兔抗重組UL17蛋白多克隆抗體制備
            2.2.10 鼠抗重組UL17蛋白多克隆抗體制備
            2.2.11 多克隆抗體粗提純化
        2.3 鴨瘟病毒UL17基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)時相研究
            2.3.1 引物合成及特異性驗(yàn)證
            2.3.2 藥物抑制試驗(yàn)確定UL17基因的類型
            2.3.3 DPV UL17基因轉(zhuǎn)錄類型研究
            2.3.4 DPV UL17基因表達(dá)時相研究
        2.4 鴨瘟病毒UL17基因編碼蛋白在DEF中的定位研究
            2.4.1 間接免疫熒光檢測DPV UL17蛋白在DEF中的分布
            2.4.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
        2.5 鴨瘟病毒UL17蛋白與UL25蛋白、UL26.5蛋白的細(xì)胞共定位研究
            2.5.1 雙重間接免疫熒光檢測DPV UL17蛋白與UL25蛋白、UL26.5蛋白的細(xì)胞共定位情況
            2.5.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
    3 結(jié)果
        3.1 生物信息學(xué)分析
            3.1.1 DPV UL17基因核酸序列分析
            3.1.2 DPV UL17蛋白的理化性質(zhì)
            3.1.3 UL17二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.2 鴨瘟病毒UL17基因克隆表達(dá)、多克隆抗體制備
            3.2.1 DPV UL17基因擴(kuò)增
            3.2.2 T克隆pMD20T-UL17鑒定
            3.2.3 重組表達(dá)載體pET32a-UL17鑒定
            3.2.4 重組UL17蛋白表達(dá)及純化
            3.2.5 重組UL17蛋白反應(yīng)原性檢測
            3.2.6 重組蛋白多克隆抗體的制備、純化
        3.3 鴨瘟病毒UL17基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)時相研究
            3.3.1 引物特異性驗(yàn)證
            3.3.2 藥物抑制試驗(yàn)確定UL17基因的類型
            3.3.3 實(shí)時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
            3.3.4 鴨瘟病毒UL17基因轉(zhuǎn)錄時相分析
            3.3.5 鴨瘟病毒UL17基因表達(dá)時相分析
        3.4 鴨瘟病毒UL17基因編碼蛋白在DEF中的定位研究
        3.5 鴨瘟病毒UL17蛋白與UL25蛋白、UL26.5蛋白的細(xì)胞共定位研究
            3.5.1 UL17蛋白與UL25蛋白的共定位情況
            3.5.2 UL17蛋白與UL26.5蛋白的細(xì)胞共定位情況
    4 討論
        4.1 生物信息學(xué)分析
        4.2 鴨瘟病毒UL17基因克隆表達(dá)、多克隆抗體制備
        4.3 鴨瘟病毒UL17基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)時相研究
        4.4 鴨瘟病毒UL17基因編碼蛋白在DEF中的定位研究
        4.5 鴨瘟病毒UL17蛋白與UL25蛋白、UL26.5蛋白的細(xì)胞共定位研究
三、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介及攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3020115