本試驗結(jié)合傳統(tǒng)細菌學鑒定方法和分子生物學方法,從發(fā)病死亡的林麝肺組織和肝組織中分離鑒定出了三株銅綠假單胞菌,提取分離株的粗毒素并作用于家兔外周血淋巴細胞,觀察粗毒素對淋巴細胞的增殖影響。根據(jù)文獻合成保守性通用引物,對PAsp-1、PAsp-2、PAsp-3的16SrDNA進行擴增和目標片段測序,將測序結(jié)果在NCBI上進行相似性比較,運用生物學軟件DNA star7.1進行發(fā)育樹的構(gòu)建,并結(jié)合常規(guī)的細菌學鑒定結(jié)果,最終確定PAsp-1、PAsp-2、PAsp-3為銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。采用單因素試驗對各菌株的培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化,確定了PAsp-1、PAsp-2和PAsp-3的最佳液體培養(yǎng)條件均為：溫度40℃,pH值6.5。在上述最佳條件下培養(yǎng)銅綠假單胞菌,三株菌的增殖速度均在6-14h最快,在14h時達到峰值。藥物敏感性試驗結(jié)果顯示,PAsp-1、PAsp-2和PAsp-3均對慶大霉素、丁胺卡那霉素、哌拉西林、頭孢他啶、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星敏感；對羧芐青霉素、四環(huán)素和頭孢曲松中度敏感；對青霉素、頭孢唑啉、氨芐西林、紅霉素、復方新諾明和美滿霉素具有耐藥... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 銅綠假單胞菌
    1.2 銅綠假單胞菌的分離鑒定
    1.3 我國養(yǎng)殖業(yè)中銅綠假單胞菌的感染現(xiàn)狀
    1.4 銅綠假單胞菌主要毒力因子的致病作用
        1.4.1 蛋白酶
        1.4.2 外毒素A
        1.4.3 綠膿菌素
        1.4.4 鼠李糖脂
        1.4.5 內(nèi)毒素
        1.4.6 菌毛與鞭毛
        1.4.7 其它致病因子
    1.5 我國人工養(yǎng)殖林麝的現(xiàn)狀
    1.6 本研究的目的和意義
2. 試驗材料
    2.1 試驗病料和試驗動物
    2.2 主要培養(yǎng)基
    2.3 主要試劑和藥品
    2.4 試驗儀器
3. 試驗方法
    3.1 菌株的分離鑒定
        3.1.1 樣品采集
        3.1.2 分離與純化
        3.1.3 形態(tài)及培養(yǎng)特性
        3.1.4 理化特性
        3.1.5 菌種保存
        3.1.6 16SrDNA基因序列測定與系統(tǒng)發(fā)育學分析
    3.2 林麝源銅綠假單胞菌的優(yōu)化培養(yǎng)、耐藥性和致病性試驗
        3.2.1 菌株培養(yǎng)的最適溫度和最適pH值
        3.2.2 平板計數(shù)法測定活菌數(shù)
        3.2.3 藥物敏感性測定
        3.2.4 致病性試驗
    3.3 林麝源銅綠假單胞菌的毒素研究
        3.3.1 毒素的粗提
        3.3.2 兔外周血淋巴細胞的分離和培養(yǎng)
        3.3.3 體外淋巴細胞增殖試驗
4. 試驗結(jié)果
    4.1 林麝源銅綠假單胞菌的分離鑒定
        4.1.1 菌株分離與純化
        4.1.2 分離菌株形態(tài)及染色特性
        4.1.3 菌株16SrDNA分子鑒定
    4.2 林麝源銅綠假單胞菌的優(yōu)化培養(yǎng)、耐藥性和致病性試驗
        4.2.1 菌株培養(yǎng)的最適溫度和最適pH值
        4.2.2 平板計數(shù)法測定活菌數(shù)
        4.2.3 藥物敏感性試驗
        4.2.4 致病性試驗
    4.3 銅綠假單胞菌的毒素研究
        4.3.1 毒素濃度的測定
        4.3.2 兔外周血淋巴細胞的分離
        4.3.3 銅綠假單胞菌毒素對家兔外周血淋巴細胞增殖的影響
5. 討論
    5.1 菌株的分離鑒定
    5.2 菌株的優(yōu)化培養(yǎng)、耐藥性和致病力試驗
    5.3 粗毒素研究
        5.3.1 粗毒素的提取和淋巴細胞的分離培養(yǎng)
        5.3.2 淋巴細胞增殖試驗
6. 結(jié)論
7. 本論文的創(chuàng)新性
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3018648