本文關(guān)鍵詞：抗禽H9N2流感病毒樹突狀細(xì)胞靶向重組乳酸菌的構(gòu)建及其免疫效果評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究利用乳酸菌作為黏膜疫苗遞呈載體的諸多優(yōu)勢,構(gòu)建了特異性靶向樹突狀細(xì)胞的抗H9N2禽流感病毒的重組乳酸菌,并研究了該重組乳酸菌對小腸上皮細(xì)胞的黏附能力以及評價了其對小鼠的免疫效果。本研究首先對HA-GCN4-DCpep基因序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化,之后將其連接到穿梭表達(dá)載體p SSIP409上,構(gòu)建重組表達(dá)載體p SSIP409-HA-GCN4-DCpep。該重組載體隨后經(jīng)過電轉(zhuǎn)化途徑導(dǎo)入乳酸菌NC8內(nèi),構(gòu)建出L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌。通過質(zhì)粒雙酶切和western blot實驗證實,該重組乳酸菌構(gòu)建正確并且能夠正確表達(dá)出具有反應(yīng)原性的H9N2禽流感病毒的HA蛋白。L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌按照免疫程序免疫BALB/c小鼠,研究其對腸上皮細(xì)胞的黏附能力。本實驗分別在免疫的不同時間點,收集小鼠腸段勻漿液,10倍倍比稀釋后進(jìn)行涂板計數(shù)。結(jié)果顯示,重組乳酸菌能夠在小鼠空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸內(nèi)黏附并定植。免疫攻毒實驗結(jié)果表明,L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌免疫小鼠后能夠誘導(dǎo)較好的黏膜免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)脾、PP結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)中CD3+CD4+和CD3+CD8+T增殖,引起腸道和肺泡內(nèi)特異性s Ig A的分泌以及血清中特異性Ig G和多種細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-6、IL-10)的表達(dá)。與L.p對照組相比,L.p-HA-GCN4-DCpep組小鼠攻毒后的體重下降程度最輕,而且s Ig A和Ig G抗體水平明顯高于對照組。上述研究結(jié)果表明,L.p-HA-GCN4-DCpep重組乳酸菌具有良好的免疫原性,可以抵抗H9N2禽流感病毒的感染,其中HA的修飾標(biāo)簽—樹突狀細(xì)胞靶向肽(DCpep)在乳酸菌誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答中發(fā)揮了重要作用。本研究為進(jìn)一步探討重組乳酸菌在激發(fā)黏膜免疫反應(yīng)過程中,樹突狀細(xì)胞調(diào)控黏膜免疫應(yīng)答的機制及研制抗禽流感口服疫苗奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：H9N2禽流感病毒 重組乳酸菌 DCpep 黏附 黏膜免疫
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 內(nèi)容提要4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 引言11-12
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述 乳酸菌在黏膜免疫遞呈系統(tǒng)中的研究進(jìn)展12-19
• 一、LAB疫苗的研究及應(yīng)用13-16
• 二、影響LAB疫苗免疫原性的因素16-17
• 三、增強LAB疫苗黏膜免疫應(yīng)答的策略17-18
• 四、結(jié)語18-19
• 第二篇 研究內(nèi)容19-45
• 第一章 抗H9N2禽流感病毒DC靶向重組乳酸菌的構(gòu)建19-29
• 1.1 材料19-21
• 1.2 方法21-25
• 1.3 結(jié)果25-28
• 1.4 討論28
• 1.5 小結(jié)28-29
• 第二章 重組乳酸菌對腸上皮細(xì)胞的黏附能力研究29-33
• 2.1 材料29
• 2.2 方法29-31
• 2.3 結(jié)果31-32
• 2.4 討論32
• 2.5 小結(jié)32-33
• 第三章 重組乳酸菌的黏膜免疫效果評價33-45
• 3.1 材料33-34
• 3.2 方法34-37
• 3.3 結(jié)果37-42
• 3.4 討論42-44
• 3.5 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-59
• 導(dǎo)師簡介59-60
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果60-61
• 致謝61

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本文編號：301819