結(jié)核分枝桿菌是一種能持留于宿主巨噬細(xì)胞內(nèi)的病原菌,它主要感染肺部,引起肺結(jié)核。在感染過(guò)程中,它的潛伏特性和適應(yīng)環(huán)境變化的能力,是結(jié)核病難以控制和根除的根本原因。世界上將近1/3的人口皮膚試驗(yàn)為感染陽(yáng)性,被認(rèn)為是細(xì)菌攜帶者,每年引起超過(guò)800萬(wàn)人患病,結(jié)核病仍然是世界第二大導(dǎo)致成年人死亡的傳染病。結(jié)核分枝桿菌的持留感染狀態(tài)已經(jīng)成為消滅結(jié)核病的最大障礙之一已有研究表明,一些PE/PPE家族蛋白及細(xì)胞壁成分有助于結(jié)核分枝桿菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)的持留存活。而Rv3802c蛋白參與結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁的構(gòu)建,且含有PE/PPE家族蛋白的同源區(qū),但是其在分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞過(guò)程中的具體作用仍然未知。本研究設(shè)計(jì)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)Rv3802c蛋白的巨噬細(xì)胞系,以分析該細(xì)胞系表達(dá)譜發(fā)生的變化,來(lái)推測(cè)Rv3802c蛋白在結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞過(guò)程中可能發(fā)揮的作用。本研究利用重疊延伸PCR技術(shù),擴(kuò)增出含His、Flag標(biāo)簽的rv3802c全長(zhǎng)基因38LHF和rv3802c截短基因38SHF,將其克隆到真核表達(dá)載體pCDNA3.1（+）上,測(cè)序驗(yàn)證后,將內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)和增強(qiáng)型紅色熒光蛋白基因片段IRES-DsRed... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

結(jié)核分枝桿菌感染模型

學(xué)位論文 第二章穩(wěn)定表達(dá)結(jié)核分枝桿菌Rv3802c的RAW264.7c信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果白信號(hào)肽預(yù)測(cè)分析（圖2-2),結(jié)果顯示該蛋白的1?40 aa為可能的了獲取更可靠的結(jié)果，設(shè)計(jì)兩種基因引物，一種包括信號(hào)SgnalP-4.1 prediction (gram* networks): gi_15810938_ref_NP_218319 1_

為了獲取更可靠的結(jié)果，設(shè)計(jì)兩種基因引物，一種包括信號(hào)肽，一種不包。SgnalP-4.1 prediction (gram* networks): gi_15810938_ref_NP_218319 1_C^SCOf? I I1.0 - 一^ S score . ^Y-scor0 ——08 - V \06 - \g V (? 04 ? A V.A-1III - - -1.. 00 JlllllllllllllllllllllllilllllillllllllllllllWH^TMrtiWKKsnnmHR ■ **<mimbvv?IV iVAWI uinrMespraAVPMSVI，p<M>T0 10 20 30 40 50 60 70Position圖2-2 Rv3802c蛋白信號(hào)狀預(yù)測(cè)Fig 2-2 The prediction ofRv3802c signal peptide重疊延伸PCR擴(kuò)增結(jié)果1%瓊脂糖凝膠電泳分析，顯示重疊延伸PCR的第一步PCR擴(kuò)增出的片段大小分別為和920 bp左右，與38L和38S基因大小相符；擴(kuò)增出的200 bp左右的片段，與HisFlag-tag60 bp)大小相符（圖2-3A)。第二步PCR擴(kuò)增出1200 bp和1100 bp左右的片段，與R8LHF和38SHF大小相符（圖2-3B)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]牛結(jié)核病病原生態(tài)學(xué)和流行病學(xué)研究[J]. 劉思國(guó),王春來(lái),張秀華,郭設(shè)平,郭洋,邵美麗.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2005(03)
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碩士論文
[1]結(jié)核分支桿菌Rv0199和Rv3802c蛋白單克隆抗體的制備[D]. 劉銀冰.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3017787