發(fā)布時間：2021-02-04 04:50

　　本研究旨在建立一種操作簡單的仔豬小腸上皮細胞體外培養(yǎng)體系,為豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的相關(guān)研究提供材料。研究以未吃初乳的新生仔豬作為腸道供體,采用腸腔面刮取腸黏膜和機械分離分散的方式進行原代細胞的體外分離。采用0.1%胰蛋白酶差速消化法進行仔豬小腸上皮細胞的純化;比較新生弱仔豬和正常仔豬作為供體對原代小腸上皮細胞活性的影響;MTT法比較不同代次原代細胞的增殖活性;免疫熒光和實時熒光定量RT-PCR方法檢測PEDV毒株CV777在原代小腸上皮細胞感染和增殖情況。結(jié)果顯示,本研究建立的體外分離培養(yǎng)方法能獲得增殖活性良好的原代小腸上皮細胞,具有明顯的"S"型細胞增殖曲線。通過胰酶差速消化可得到純度高、形態(tài)單一的小腸上皮細胞,同時細胞連續(xù)傳代5次仍保持良好的增殖活性。弱仔豬和正常仔豬分離培養(yǎng)的小腸上皮細胞的增殖活性比較顯示,兩者并沒有明顯區(qū)別,這為降低原代細胞培養(yǎng)的成本提供新的思路。免疫熒光和實時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示,PEDV可感染本方法分離培養(yǎng)的仔豬原代小腸上皮細胞,并在其中進行復制增殖。本研究建立了一種操作簡單、實... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

仔豬原代小腸上皮細胞培養(yǎng)第5(A)和15天(B)的形態(tài)

仔豬原代小腸上皮細胞的鑒定

仔豬原代小腸上皮細胞增殖活性

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]2016-2019年廣西部分豬場仔豬病毒性腹瀉的流行病學調(diào)查[J]. 段群棚,李曉玉,趙碩,秦毅斌,盧冰霞,李斌,蘇乾蓮,趙武,何穎,梁家幸,蔣冬福,周英寧,陳忠偉.  中國畜牧獸醫(yī). 2020(02)
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本文編號：3017752