新孢子蟲�。∟eosporiasis）是由犬新孢子蟲（Neospora caninum）引起的原蟲病,呈世界性分布,感染率為10%-40%,最高達(dá)82%。犬及犬科動(dòng)物是新孢子蟲的終末宿主,中間宿主范圍廣泛,包括牛、羊、鹿、馬、犬、兔等家畜及海洋哺乳動(dòng)物。其中對(duì)牛的危害最為嚴(yán)重,感染后引起新生犢牛運(yùn)動(dòng)障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病,懷孕母牛出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎等,但是檢測(cè)方法報(bào)道有限,尤其是檢測(cè)循環(huán)抗原的相關(guān)報(bào)道。因此,在此基礎(chǔ)上建立一種便捷、靈敏、特異、快速的檢測(cè)方法對(duì)牛新孢子蟲病的診斷及預(yù)防顯得尤為重要。本研究以新孢子蟲表面抗原P40作為免疫抗原,制備了單克隆抗體,對(duì)其進(jìn)行了亞細(xì)胞定位,隨后建立了檢測(cè)循環(huán)抗原的雙抗夾心ELISA方法,利用純化的新孢子蟲Nc P40重組蛋白作為包被抗原建立了間接ELISA、Dot-ELISA和膠體金試紙條檢測(cè)方法,以期為牛新孢子蟲病的診斷提供更加快速簡(jiǎn)便的方法�？筃c P40單克隆抗體的制備與Nc P40蛋白亞細(xì)胞定位:本研究成功表達(dá)并純化了新孢子蟲Nc P40蛋白,經(jīng)驗(yàn)證免疫原性和反應(yīng)原性良好;利用純化的Nc P40重組蛋白免疫Balb/c小鼠,篩選得到6... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

新孢子蟲蟲體形態(tài)，D、E、F分別為新孢子蟲速殖子、包囊、卵囊（引

蟲在終末宿主腸上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)育，在中間宿主體內(nèi)進(jìn)行出體外后 24~48h 會(huì)形成孢子化卵囊，終末宿主犬食入在胃內(nèi)被消化，釋放的子孢子和速殖子侵入宿主有核細(xì)細(xì)胞內(nèi)形成納蟲泡，逃避宿主免疫，進(jìn)而進(jìn)行發(fā)育和、小配子結(jié)合成合子，最后發(fā)育為卵囊，卵囊隨糞便卵囊污染飼料和飲水后，中間宿主便可通過食入感染新以通過水平和垂直兩種方式進(jìn)行傳播，垂直傳播是牛及要方式，母牛將病原傳播給胎兒，胎兒可以作為儲(chǔ)存宿主作為新孢子蟲的終末宿主，大多數(shù)新生幼犬在產(chǎn)后 5明多數(shù)可能是在產(chǎn)后泌乳期感染[34]。國(guó)外有報(bào)道稱，1下的幼犬新孢子蟲感染陽性率只有 3%（4/118）[35]。可分來自垂直傳播，水平傳播在新孢子蟲病感染中具有重

2 試驗(yàn)結(jié)果2.1 NcP40 的原核表達(dá)成功擴(kuò)增了NcP40抗原相關(guān)結(jié)構(gòu)域，大小為777bp，見圖1.1A；經(jīng)雙酶切鑒定成功的陽性質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化表達(dá)感受態(tài)，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)的重組蛋白，經(jīng)SDS-PAGE分析，結(jié)果顯示，重組蛋白大小為40KDa，見圖1.1B；經(jīng)Western bloting 鑒定，


本文編號(hào)：3017473