發(fā)布時(shí)間：2021-02-03 17:22

　　胞漿脂滴（Cytoplasmic lipid droplets, CLDs）（Martin and Parton2006）（Martin andParton2006）（Martin and Parton2006）（Martin and Parton2006）（Martin and Parton2006）由一個(gè)中性脂質(zhì)構(gòu)成的疏水核心外被單層脂質(zhì)分子層構(gòu)成，在單層膜上還有多種功能各異的蛋白質(zhì)，從而使脂滴成為一類多功能的動(dòng)態(tài)細(xì)胞器，并廣泛存在于多種細(xì)胞中，脂滴的生理障礙與多種脂代謝疾病和癌癥相關(guān)。乳脂肪是乳汁中的主要成分之一，并主要以乳脂滴的形式存在，而乳脂滴主要由甘油三酯和少量膽固醇酯外被三層磷脂分子層構(gòu)成。乳脂滴從乳腺上皮細(xì)胞的頂端分泌的過程至少涉及嗜乳脂蛋白（BTN）、黃嘌呤氧化還原酶（XOR）和脂肪分化相關(guān)蛋白（ADRP）三種蛋白的作用。ADRP是脂滴表面蛋白家族（PAT家族）的成員之一，其組織表達(dá)廣泛并被認(rèn)為參與了脂滴的形成、轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌過程，還可能作為一種脂肪酸結(jié)合蛋白促進(jìn)長鏈脂肪酸的攝取。ADRP基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)受到過氧化物酶體增殖激活物受體（peroxisome proli... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 胞漿脂滴與乳脂
        1.1.1 脂滴的發(fā)現(xiàn)與研究歷史
        1.1.2 脂滴的大小、數(shù)量與結(jié)構(gòu)
        1.1.3 脂滴在細(xì)胞中的功能
        1.1.4 脂滴的形成與生長
        1.1.5 脂滴的蛋白
        1.1.6 脂滴與其他細(xì)胞器的相互作用
        1.1.7 脂滴內(nèi)脂質(zhì)的動(dòng)員
        1.1.8 脂滴相關(guān)的生理和疾病
        1.1.9 乳脂與山羊乳
    1.2 脂肪分化相關(guān)蛋白（perilipin2/ADRP/ adipophilin）與脂質(zhì)代謝
        1.2.1 脂肪分化相關(guān)蛋白的發(fā)現(xiàn)及其組織分布
        1.2.2 ADRP 在組織細(xì)胞中對(duì)脂質(zhì)代謝的影響
    1.3 脂肪分化相關(guān)蛋白基因的表達(dá)調(diào)控
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 奶山羊 ADRP 基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定
    引言
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 pAdTrack-CMV-ADRP 腺病毒穿梭載體的構(gòu)建與鑒定
        2.1.4 pAdEasy-ADRP 重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定
        2.1.5 重組腺病毒的包裝與擴(kuò)增
        2.1.6 腺病毒滴度的測定
        2.1.7 重組腺病毒感染乳腺上皮細(xì)胞最佳 MOI 值（最佳感染復(fù)數(shù)）的確定
        2.1.8 重組腺病毒對(duì)奶山羊 ADRP 基因過表達(dá)和沉默效果檢測
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 pAdTrack-CMV-ADRP 穿梭載體的構(gòu)建與鑒定
        2.2.2 pAdEasy-ADRP 重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定
        2.2.3 Ad-ADRP 過表達(dá)腺病毒載體的包裝、擴(kuò)增與病毒滴度測定
        2.2.4 腺病毒感染乳腺上皮細(xì)胞最佳 MOI 值的確定
        2.2.5 重組腺病毒對(duì)奶山羊 ADRP 基因過表達(dá)和沉默效果檢測
    2.3 討論
        2.3.1 關(guān)于重組腺病毒載體的構(gòu)建和病毒包裝
        2.3.2 關(guān)于基因過表達(dá)和沉默效率的檢測
    2.4 小結(jié)
第三章 奶山羊 ADRP 基因?qū)?GMEC 脂質(zhì)含量和脂滴的影響
    引言
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 油紅 O 染色檢測 ADRP 對(duì) GMEC 脂滴生成和脂解的影響
        3.1.4 GPO-Trider 法和銅試劑皂化法檢測 ADRP 對(duì)細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)甘油三酯、總膽固醇和游離脂肪酸的含量的影響
        3.1.5 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）技術(shù)檢測 ADRP 對(duì)細(xì)胞長鏈脂肪酸成分和外源油酸攝取的影響
        3.1.6 激光共聚焦顯微鏡檢測 ADRP 對(duì)細(xì)胞脂滴的影響
        3.1.7 透射電子顯微鏡（TEM）檢測 ADRP 對(duì)細(xì)胞中脂滴形態(tài)學(xué)的影響
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 ADRP 基因?qū)θ橄偕掀ぜ?xì)胞脂滴生成的影響
        3.2.2 ADRP 基因?qū)θ橄偕掀ぜ?xì)胞脂質(zhì)含量的影響
        3.2.3 ADRP 基因?qū)θ橄偕掀ぜ?xì)胞脂肪酸組成和外源油酸攝取的影響
        3.2.4 ADRP 基因?qū)θ橄偕掀ぜ?xì)胞 ATGL 介導(dǎo)的脂解的影響
        3.2.5 ADRP 基因?qū)θ橄偕掀ぜ?xì)胞內(nèi)脂滴的形態(tài)學(xué)影響
    3.3 討論
        3.3.1 關(guān)于 ADRP 基因?qū)θ橄偕掀ぜ?xì)胞脂質(zhì)積累的影響
        3.3.2 關(guān)于 ADRP 對(duì)乳腺上皮細(xì)胞脂滴大小和分泌的影響
    3.4 小結(jié)
第四章 奶山羊 ADRP 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
    引言
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 PPARG 及其激動(dòng)劑對(duì)奶山羊 ADRP 基因表達(dá)的影響
        4.1.4 奶山羊 ADRP 基因啟動(dòng)子的克隆與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測
        4.1.5 雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)檢測奶山羊 ADRP 基因啟動(dòng)子活性
        4.1.6 凝膠電泳遷移試驗(yàn)（EMSA）檢測 PPARG 與 ADRP 基因啟動(dòng)子 PPRE 的體外結(jié)合情況
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 PPARG 及其激動(dòng)劑對(duì) ADRP 基因表達(dá)的影響
        4.2.2 ADRP 基因啟動(dòng)子的克隆與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測
        4.2.3 奶山羊 ADRP 基因啟動(dòng)子活性的鑒定及 PPARG 對(duì)啟動(dòng)子活性的影響
        4.2.4 PPRE 位點(diǎn)定點(diǎn)突變和缺失對(duì) PPARG 誘導(dǎo)的 ADRP 基因啟動(dòng)子活性的影響
        4.2.5 凝膠電泳遷移試驗(yàn)（EMSA）檢測 PPARG 與 PPRE 體外結(jié)合情況
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄 1
    附錄 2
    附錄 3
    附錄 4
    附錄 5
    附錄 6
    附錄 7
    附錄 8
    附錄 9
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3016883