兔出血癥（Rabbit hemorrhagic disease，RHD）是一種由兔出血癥病毒（Rabbit hemorrhagicdisease virus，RHDV）引起的急性、高度傳染性、高死亡率的疾病。RHDV主要感染成年兔的肝臟、肺臟、脾臟等器官。RHDV屬于杯狀病毒科，其主要的結(jié)構(gòu)蛋白衣殼蛋白VP60是病毒的免疫保護(hù)性抗原，在誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)中起著重要的作用。研究兔肝臟中與VP60相互作用的蛋白對(duì)闡明RHDV致病機(jī)制及兔出血癥的防控具有重要意義。免疫球蛋白（Immunoglobulin）是一種具有抗體活性的球蛋白，在動(dòng)物機(jī)體抵抗細(xì)菌、病毒感染過程中發(fā)揮著重要的作用。免疫球蛋白由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)中存在兩種不同類型的輕鏈kappa和lambda。本研究室使用酵母雙雜交技術(shù)和表達(dá)克隆技術(shù)分別篩選與VP60相互作用的蛋白，提示兔免疫球蛋白輕鏈kappa（Kappa）與RHDV VP60可能存在相互作用。研究發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白輕鏈有助于抗原抗體結(jié)合，能夠促進(jìn)B淋巴細(xì)胞受體的表達(dá)和抗體的分泌，廣泛參與免疫調(diào)節(jié)。已經(jīng)證實(shí)免疫球蛋白輕鏈能夠結(jié)合肥大細(xì)胞，非特異性的輕鏈能... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 自然史
    1.2 病原學(xué)
    1.3 臨床癥狀和病理變化
    1.4 流行病學(xué)
    1.5 病毒生活史
    1.6 兔出血癥的抵抗機(jī)制
    1.7 診斷方法
        1.7.1 血凝及血凝抑制試驗(yàn)（HA/HI）
        1.7.2 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）
        1.7.3 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）
        1.7.4 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（real-time PCR）
        1.7.5 環(huán)介導(dǎo)恒溫快速擴(kuò)增（LAMP）
    1.8 防控及疫苗
    1.9 蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)
        1.9.1 酵母雙雜交技術(shù)（ Yeast two hybrid system）
        1.9.2 噬菌體表面展示技術(shù)（Phage surface display techniques, PDT）
        1.9.3 GST-pulldown 技術(shù)
        1.9.4 蛋白質(zhì)細(xì)胞內(nèi)定位技術(shù)
    1.10 免疫球蛋白輕鏈研究進(jìn)展
    1.11 本研究的目的及意義
第二章 兔免疫球蛋白輕鏈 kappa 與 VP60 相互作用的驗(yàn)證
    2.1 材料和方法
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒、抗體、細(xì)胞
        2.1.2 試劑與藥品
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 Kappa 基因的克隆與表達(dá)
        2.1.5 GST-polldown 驗(yàn)證 Kappa 蛋白與 VP60 的相互作用
        2.1.6 細(xì)胞內(nèi)共定位驗(yàn)證 Kappa 蛋白與 VP60 的相互作用
        2.1.7 ELISA 驗(yàn)證 Kappa 蛋白與 VP60 的相互作用
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 Kappa 基因的克隆
        2.2.2 Kappa 蛋白的表達(dá)與純化
        2.2.3 Kappa 蛋白與 VP60 相互作用的 GST-polldown 驗(yàn)證結(jié)果
        2.2.4 Kappa 基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 Kappa 蛋白與 VP60 細(xì)胞內(nèi)共定位結(jié)果
        2.2.6 Kappa 蛋白與 VP60 相互作用的 ELISA 驗(yàn)證結(jié)果
    2.3 討論
        2.3.1 Kappa 基因的克隆與表達(dá)
        2.3.2 Kappa 蛋白與 VP60 相互作用的驗(yàn)證
第三章 Kappa 蛋白中和兔出血癥病毒動(dòng)物感染試驗(yàn)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑及儀器
        3.1.3 Kappa 蛋白與 RHDV 相互作用血凝抑制試驗(yàn)驗(yàn)證
        3.1.4 Kappa 蛋白中和兔出血癥病毒動(dòng)物感染試驗(yàn)
        3.1.5 RHDV 核酸的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果
        3.2.2 兔出血癥病毒攻毒劑量
        3.2.3 動(dòng)物感染試驗(yàn)結(jié)果
        3.2.4 RHDV 核酸實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)結(jié)果
    3.3 討論
        3.3.1 Kappa 蛋白與 RHDV 相互作用的研究
        3.3.2 Kappa 蛋白中和兔出血癥病毒動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]人工感染兔出血癥病毒兔肝臟的蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D]. 李茂中.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[2]兔出血癥病毒VP60蛋白與膜突蛋白相互作用的鑒定[D]. 穆亞芳.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[3]應(yīng)用GST Pull-Down實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NF-κB相互作用多肽[D]. 李生茂.第三軍醫(yī)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3015849