化膿隱秘桿菌（Trueperella pyogenes,T.pyogenes）是普遍存在于牛、羊、豬及其他重要經(jīng)濟動物黏膜上的一種條件性致病菌。T.pyogenes可在家畜間廣泛傳播,并導致多種皮膚、內(nèi)臟器官及關(guān)節(jié)的非特異性化膿性感染。T.pyogenes溶血素蛋白（Pyolysin,PLO）是T.pyogenes分泌的唯一一種溶血素,也是T.pyogenes首要的毒力因子。目前分離的所有T.pyogenes菌株中都可以檢測到PLO的表達。本研究首先利用重組蛋白PLO（recombinant PLO,rPLO）制備了不同動物抗rPLO多克隆抗體,并檢測了五段位于PLO第1-3結(jié)構(gòu)域（PLO D123）中截短蛋白rPLO 1-110、rPLO95-156、rPLO 141-204、rPLO 190-296以及rPLO 281-393與不同動物抗rPLO多克隆抗體的免疫反應性。Western-blot結(jié)果表明,兔抗rPLO多抗只能與rPLO 1-110及rPLO 190-296發(fā)生特異性反應,鼠抗rPLO多抗可以與rPLO 1-110、rPLO 95-156及rPLO 190-296發(fā)生特... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

產(chǎn)氣莢膜梭菌溶血素PFO分子結(jié)構(gòu)示意圖

材料與方法er Premier5.0 軟件設(shè)計融合片段上、下游引物，并在融合區(qū)域的上游引物中插入序-GGT-GGT-GGG-TCT-GGT-GGT-GGC-GGC-TCG 的一段核酸片段，這段序列編碼為 10 個氨基酸殘基的柔性連接肽（linker），其氨基酸序列為 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-G-Gly-Gly-Ser。同時引入酶切位點 EcoR Ι（GAATTC）、Xho Ι（CTCGAG）；引物的爾濱新�；蚬就瓿�，如表 2-3。.6.2 重組抗原原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建重組抗原編碼核酸序列需要由 PLO D123 編碼核酸中的 plo-85-411 片段及 plo-649-9別與 PLO D4 編碼核酸 plo-D4 相融合，所以我們采用融合 PCR 的方法將兩個片段完整的重組抗原編碼核酸序列，融合示意圖如圖 2-1。

東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學碩士學位論文3 結(jié)果與分析3.1 PLO D123 截短片段的制備構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入 E. coli Rosetta（DE3） 感受態(tài)細胞中，經(jīng) IPTG 誘導表達、Ni-NTA Purification System 純化 后 ，通 過 SDS-PAGE 以及 以 His 單 抗作 為 檢測 抗 體 的Western-blot 進行分析，表明各截短蛋白大小與預期目的蛋白分子量相符，且蛋白條帶較為單一，因此截短蛋白制備成功。截短蛋白制備合成方案如圖 3-1。


本文編號：3015637