牛結核�。˙ovine tuberculosis）是由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起的一種慢性傳染性人獸共患病，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必報傳染病，我國將其列為二類動物疫病。我國是全球第二大結核病高負擔國家，全國近一半人口潛伏感染結核病，遠高于全球三分之一的平均水平，而人感染結核病約有10.6%是由牛結核引起的；據(jù)統(tǒng)計，全球約有5000萬頭的牛感染或患有牛結核病，造成每年大約30億美元的經(jīng)濟損失，不僅影響了世界奶牛養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)健康的發(fā)展，而且嚴重威脅著公共衛(wèi)生及食品安全。因此，開展牛結核流行病學調(diào)查及牛分枝桿菌的病原學研究，對防控及根除牛結核具有重要意義。本實驗調(diào)查了我國部分省份的牛結核病流行情況，從新疆地區(qū)分離60株菌，用兩級多重PCR方法鑒定分離菌株并檢測牛結核分枝桿菌的耐藥性。（1）牛結核病流行病學調(diào)查：本實驗室于2011年10月至2012年6月先后赴新疆、河北、寧夏自治區(qū)等12個省份的29個縣共97個場村采血，經(jīng)γ-干擾素酶聯(lián)免疫試驗檢測篩選，被檢測的1187頭奶牛中，陽性286份，陽性率24.1%。共檢測97個群，群陽性率54.6%。（2）牛分... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
第一篇 文獻綜述
    1 牛結核病概況
        1.1 牛結核病的病原學特征
        1.2 牛結核病的危害
    2 牛結核病的分布和流行情況
        2.1 發(fā)達國家和地區(qū)
        2.2 發(fā)展中國家和地區(qū)
        2.3 我國的現(xiàn)狀
    3 牛結核的診斷
        3.1 細菌學檢查方法
        3.2 免疫學方法
        3.3 分子生物學方法
    4 分枝桿菌的培養(yǎng)法
        4.1 固體培養(yǎng)法
        4.2 液體培養(yǎng)法
    5 非結核分枝桿菌的概況
    6 結核分枝桿菌耐藥性
    7 研究目的及意義
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 2011- 2012 年全國牛結核血清學篩查
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 樣品
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 主要儀器
            1.2 牛結核分枝桿菌 PPD 皮內(nèi)變態(tài)反應方法
                1.2.1 操作步驟
                1.2.2 結果判定（依照國標）
                1.2.3 注意事項
            1.3 γ-干擾素酶聯(lián)免疫試驗
                1.3.1 全血培養(yǎng)
                1.3.2 免疫試驗
                1.3.3 質(zhì)量控制
                1.3.4 結果判定
        2 結果
            2.1 個體陽性率
            2.2 群陽性率
            2.3 群間陽性率對比
            2.4 不同牛結核病檢疫方法的比較結果
            2.5 禽分枝桿菌或其他 NTM 的感染情況
        3 討論
            3.1 我國牛結核病和結核病流行病學調(diào)查結果
            3.2 不同牛結核病檢測方法的比較
            3.3 影響牛結核病傳播的因素
                3.3.1 野生動物結核病
                3.3.2 畜齡及性別
                3.3.3 飼養(yǎng)環(huán)境
            3.4 我國牛結核的感染趨勢及禽分枝桿菌感染
            3.5 做好牛結核病的防控及根除計劃
    第二章 牛源分枝桿菌的分離與鑒定
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株
                1.1.2 主要試劑及溶液
                1.1.3 萋尼氏染色法試劑配制（Ziehl-Neelson）
                1.1.4 培養(yǎng)基
                    1.1.4.1 羅氏培養(yǎng)基與丙酮酸鈉培養(yǎng)基
                    1.1.4.2 液體培養(yǎng)基
                1.1.5 主要儀器
            1.2 方法
                1.2.1 病料的采集及處理
                1.2.2 分枝桿菌的初次培養(yǎng)
                1.2.3 分枝桿菌的擴大培養(yǎng)
                1.2.4 臨床分離菌株的 Ziehl-Neelsen（Z-N）染色觀察
                1.2.5 細菌 DNA 的提取
                1.2.6 細菌 DNA 的濃度測定
                1.2.7 臨床分離株的種屬多重 PCR 鑒定
                    1.2.7.1 引物的合成
                    1.2.7.2 反應體系和條件
                    1.2.7.3 判定標準
                1.2.8 臨床分離株結核分枝桿菌群內(nèi) PCR 鑒定
                    1.2.8.1 引物合成
                    1.2.8.2 反應體系和條件
                    1.2.8.3 判定標準
                1.2.9 臨床分離分枝桿菌 16S rRNA 基因序列分析
                    1.2.9.1 引物合成
                    1.2.9.2 反應體系和條件
                    1.2.9.3 PCR 反應產(chǎn)物的回收、純化及定量
                    1.2.9.4 PCR 擴增產(chǎn)物序列測序
        2 結果
            2.1 病料采集
            2.2 分枝桿菌的初次培養(yǎng)
            2.3 分枝桿菌的擴大培養(yǎng)
            2.4 臨床分離菌株的染色觀察
            2.5 細菌 DNA 的濃度
            2.6 分枝桿菌種屬鑒定結果
            2.7 結核分枝桿菌復合群鑒定結果
            2.8 16S rRNA 基因分析
                2.8.1 16S rRNA 基因 PCR 擴增結果
                2.8.2 核酸提取結果
                2.8.3 測序結果
        3 討論
            3.1 結核分枝桿菌臨床分離的重要性
            3.2 病料的采集、處理及涂片鏡檢
            3.3 培養(yǎng)基的選擇
            3.4 模板對 PCR 擴增的影響因素
            3.5 牛源非結核分枝桿菌
    第三章 牛分枝桿菌的耐藥相關基因分析及其快速檢測
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株
                1.1.2 主要溶液和試劑
                1.1.3 主要試劑及溶液
                1.1.4 含藥培養(yǎng)基
                1.1.5 主要儀器
            1.2 方法
                1.2.1 絕對濃度法
                1.2.2 耐藥基因檢測
                    1.2.2.1 DNA 模板
                    1.2.2.2 引物合成
                    1.2.2.3 PCR 擴增體系與條件
                    1.2.2.4 PCR 反應產(chǎn)物的回收、純化及定量
                    1.2.2.5 耐藥基因序列分析
        2 結果
            2.1 絕對濃度法
            2.2 耐藥基因檢測
        3 討論
結論
參考文獻
致謝
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本文編號：3014221