犬瘟熱病毒（CDV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬細(xì)小病毒（CPV）和犬腺病毒Ⅱ型（CAV-2）是引起犬常見傳染病的主要病原體,給養(yǎng)犬業(yè)帶來了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。本研究根據(jù)四種病毒在GenBank中登錄的序列,設(shè)計四條引物和四條TaqMan探針,通過優(yōu)化反應(yīng)條件以及敏感性、特異性和重復(fù)性試驗,建立四種病毒單重TaqMan實時熒光定量PCR方法以及四重TaqMan實時熒光定量PCR方法。結(jié)果表明,四種病毒單重方法對CAV-Ⅱ、CPV、CPIV最小檢出量均為101copies/μL,CDV最小檢出量為102-101copies/μL,敏感性高;標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.990;四種病毒只在本病毒陽性模板有擴(kuò)增信號,特異性強(qiáng)。CPV和CAV-Ⅱ兩種病毒組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于2%,CPIV和CDV兩種病毒組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于3%,重復(fù)性良好。檢測了 72份樣品結(jié)果均能特異性檢測出四種病毒。四重方法的敏感性,CAV-Ⅱ和CDV可以達(dá)到102copies/μL,CPV和CPIV可以達(dá)到103 copies/μL,敏感性較高;標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３?ＣＰＶ目的片段擴(kuò)增結(jié)果

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?１９??３．１．４四種病毒單重?zé)晒舛浚校茫颐舾行栽囼灲Y(jié)果??敏感性結(jié)果如（圖９、圖１０、圖１１、圖１２）顯示ＣＡＶ－ＩＩ、ＣＰＶ、ＣＰＩＶ最小檢??出量均為１〇］拷貝／｜ａＬ，ＣＤＶ最小檢出量為ｌＯＭＯ１拷貝�。�。結(jié)果表明本試驗建立的??四種病毒ＴａｑＭａｉｉ單重?zé)晒舛浚校茫曳椒舾行愿摺??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??：?：?：?ｊ?—?５０３０???????４。°°：??丨．．．．．．．４〇ａａ：?：???賺??，?３，０：?；???????分．方．觸ｊ???丨切：＞．卜叫呦．ｊ，ｌ資聲、．＇ｙｆ…．??Ｏ－．ｙｉ?ｆ，Ｗ?ＺＶ?Ｚ?？?：?－ｐ?＇．乂?」丄夕－??．１．－１￣￣ｈ－ｒ－．￣￣丨?》ｉ?？?？，Ｉ?ｉ?，》＊?１￣￣ｉ?＞?？?’?．」?■，？．，■?ｉ，，卜》ｉ?？?？，，ｉ，＞?－＞?■?ｉ?■，＞??〇?１０?２Ｑ?３０?４０?Ｃ?１０?２０?３０?ＡＯ??Ｃｙｃｌｅｓ?Ｃｙｃｌｅｓ??圖９?ＣＡＶ－１Ｉ敏感性實驗結(jié)果?圖１０?ＣＰＶ敏感性試驗結(jié)果??Ｆｉｇ．９?ＣＡＶ－ＩＩ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?Ｆｉｇ．?１０?ＣＰＶ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??ｊｒ＇￣￣￣１＾?＾￣￣＇￣￣＇￣?［ｚｚｚｒｎ?１５〇〇－ｆ＇?＇?？？?＇?？?ｉ．－：■？?■？？？?＇?ｉ??６００??：？???？？：？？？？？？?—－??

圖１５?ＣＡＶ－ＩＩ特異性試驗結(jié)果


本文編號：3013881