1997年,Wilmut等用成年體細(xì)胞獲得第一只克隆綿羊Dolly,揭開了哺乳動物體細(xì)胞核移植（somatic cell nuclear transfer, SCNT）的序幕,核移植研究進(jìn)入了一個嶄新的階段。體細(xì)胞核移植為基礎(chǔ)研究開創(chuàng)了更廣闊的應(yīng)用前景,但該仍存在很多問題亟待解決如克隆效率低,發(fā)育異常的發(fā)生率很高等。有研究表明,克隆胚胎或克隆后代的組蛋白表觀遺傳修飾出現(xiàn)不正常,表明供體細(xì)胞核在受體卵母細(xì)胞中不完全或異常的表觀遺傳是導(dǎo)致克隆胚胎發(fā)育異常的重要原因之一。目前已經(jīng)有多種HDACis應(yīng)用于體細(xì)胞重新編程方面的研究,但作用的效果差別很大,且報道大多集中在小鼠。盡管一些HDACis可以提高核重新編程,但它們同時也會對供核細(xì)胞產(chǎn)生危害。因此發(fā)現(xiàn)無毒或低毒性的HDACis可能對提高克隆效率修正不正�；虻闹匦戮幊逃葹橹匾�。本研究選取TSA和VPA兩種組蛋白去乙�；敢种苿┨幚砼３衫w維細(xì)胞,探討了HDACis對牛成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響,試通過HDACis的添加,人為地干擾牛成纖維細(xì)胞組蛋白乙�；癄顟B(tài),使之更加適于充當(dāng)供核細(xì)胞,旨在為輔助生殖技術(shù)以及克隆效率的提高提供依據(jù)。本文以培養(yǎng)到第... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 體細(xì)胞克隆概述
        1.1.1 體細(xì)胞克隆現(xiàn)狀及存在問題
        1.1.2 細(xì)胞核重新編程概述
        1.1.3 影響體細(xì)胞克隆效率因素
    1.2 組蛋白乙�；芯扛艣r
        1.2.1 組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶
        1.2.2 組蛋白去乙酰化酶
        1.2.3 組蛋白去乙�；敢种苿�
    1.3 組蛋白乙�；c細(xì)胞核重新編程
    1.4 本實驗?zāi)康暮鸵饬x
2 材料方法
    2.1 實驗藥品和主要儀器
        2.1.1 實驗藥品
        2.1.2 主要儀器
    2.2 實驗動物
    2.3 主要溶液配制
    2.4 原代胎兒成纖維細(xì)胞的獲得和原代培養(yǎng)
        2.4.1. 組織塊培養(yǎng)法
    2.5 成纖維細(xì)胞的傳代、凍存及復(fù)蘇
        2.5.1 成纖維細(xì)胞的傳代
        2.5.2 牛成纖維細(xì)胞的凍存
        2.5.3 牛成纖維細(xì)胞的復(fù)蘇
    2.6 細(xì)胞計數(shù)與生長曲線的測定
        2.6.1 細(xì)胞計數(shù)
        2.6.2 測細(xì)胞生長曲線
    2.7 MTT法測細(xì)胞活力
    2.8 核型分析
    2.9 細(xì)胞周期的測定
    2.10 REAL-TIME PCR
        2.10.1 總RNA的提取
        2.10.2 反轉(zhuǎn)錄
        2.10.3 Real-Time PCR
    2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 組蛋白乙�；敢种苿⿲ε３衫w維細(xì)胞增殖的影響
        3.1.1 TSA處理組生長曲線的測定
        3.1.2 VPA處理組生長曲線的測定
    3.2 TSA和VPA處理后對牛胎兒成纖維細(xì)胞形態(tài)的影響
    3.3 TSA和VPA處理時間對牛成纖維細(xì)胞細(xì)胞活力的影響
    3.4 TSA和VPA處理對牛纖維細(xì)胞染色體整倍性的影響
    3.5 TSA和VPA對細(xì)胞周期的影響
    3.6 TSA和VPA對牛成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的影響
4 討論
    4.1 TSA和VPA對牛成纖維細(xì)胞體外生長的影響
    4.2 TSA和VPA處理對牛成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期的影響
    4.3 TSA和VPA處理對牛成纖維細(xì)胞細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3012956