小鵝瘟是由鵝細小病毒（GPV）引起的一種急性或亞急性傳染病,1²周齡雛鵝死亡率高達90¹00%,嚴重危害養(yǎng)鵝業(yè)的健康發(fā)展。GPV是細小病毒科的重要成員,VP3蛋白是構成病毒衣殼的主要結構蛋白,能誘導機體產生中和抗體。因此,VP3蛋白成為小鵝瘟基因工程疫苗研制的首選靶蛋白。本研究通過PCR方法擴增GPV的VP3基因,將其重組至腺病毒載體,在體外包裝成能夠高效表達VP3蛋白的重組腺病毒,并觀察其免疫原性,旨在為研究GPV重組活載體疫苗奠定基礎。（1）VP3基因的重組穿梭質粒的構建:以p DC-VP3重組質粒為模板,采用PCR方法擴增獲得長度為1605 bp的VP3基因,并將其克隆至穿梭質粒pac Ad5 CMV K-Np A,獲得重組穿梭質粒pac Ad-VP3。（2）VP3重組腺病毒的構建:經Pac I線性化的pac Ad-VP3及骨架質粒pac Ad59.2-100在脂質體介導下共轉染HEK293AD細胞,獲得重組腺病毒rAd-VP3。rAd-VP3連續(xù)傳代至F6代,病毒效價可達10-8.23/0.1 m L TCID50。（3）rAd-VP... 

【文章來源】：廣東海洋大學廣東省

【文章頁數】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

GPV基因結構示意圖

圖 1-2 腺病毒結構示意圖[90]Fig.1-2 Diagram structure of adenovirus.7.2 腺病毒在動物疫苗研制中的應用腺病毒載體已在豬圓環(huán)病毒[91,92]、豬繁殖與呼吸綜合征病毒[93]、狂犬病毒[94]瘟病毒[95]和流感病毒[96]等的疫苗構建上得到廣泛應用，并取得了較為理想的免果。腺病毒載體用于構建鵝細小病毒疫苗剛剛起步，劉紅玉[97]將 GPV 與 MDPV P3 基因分別克隆到 pShuttle-CMV 載體，經 PmeI 線性化后電轉至 BJ5183 感受態(tài)菌 pAdEasy-1 腺病毒骨架質粒進行菌內的同源重組，再轉染到 HEK293 細胞，PC間接免疫熒光試驗表明構建的重組腺病毒能在真核細胞中有效表達水禽VP3蛋白研究新型的水禽細小病毒疫苗提供了一個新思路。孟繁宇[98]以同樣的方法構建PV VP3 腺病毒載體疫苗，PCR 與 Western-blot 鑒定了 VP3 蛋白在 HEK293 細胞到成功表達，并在此基礎上進行了小鼠免疫試驗，結果表明該重組腺病毒誘導小生了較好的免疫反應�？梢娤俨《居糜陂_發(fā)小鵝瘟新型基因疫苗具有較大的潛力望在實際生產中推廣應用。本研究在前人的研究基礎上，選用 Cell Biolabs 公司的新型腺病毒包裝系統(tǒng)，節(jié)省了包裝出毒的時間，另外，彌補了前人未在本體動

GPVVP3重組腺病毒的構建Fig.2-1ConstructionofGPVVP3recombinantadenoviruses

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]小鵝瘟腸道損傷機制的研究與VP3基因重組腺病毒的構建[D]. 孟繁宇.東北農業(yè)大學 2013
[2]表達H5N1禽流感病毒HA基因重組腺病毒的構建及免疫保護性研究[D]. 王偉.東北農業(yè)大學 2013
[3]水禽細小病毒VP3蛋白表位鑒定及重組腺病毒載體構建[D]. 劉紅玉.東北農業(yè)大學 2013
[4]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白基因重組腺病毒的構建及實驗免疫研究[D]. 宮婷.吉林農業(yè)大學 2013
[5]小鵝瘟病毒VP3基因的克隆表達及抗小鵝瘟病毒單克隆抗體的研制[D]. 鹿鐘文.揚州大學 2012
[6]鵝細小病毒98E鴨胚致弱株的培育及生物學特性研究[D]. 王春媛.東北農業(yè)大學 2012
[7]小鵝瘟細胞適應毒的培育及其特性的研究[D]. 劉兵.揚州大學 2012
[8]鵝細小病毒VP3基因的原核表達及其單克隆抗體的研制[D]. 王娟.揚州大學 2012
[9]抗小鵝瘟病毒單克隆抗體的制備及膠體金免疫層析試紙條的研制[D]. 劉飛.南京農業(yè)大學 2011
[10]流感病毒H5/H3亞型重組腺病毒疫苗構建及實驗免疫研究[D]. 張丹.吉林大學 2011



本文編號：3012467