牛病毒性腹瀉/黏膜病是影響全世界養(yǎng)牛業(yè)的重要疾病,BVDV病毒亞型眾多、宿主范圍廣。動物感染病毒后可引起機體免疫抑制,導致繼發(fā)感染。BVDV是黃病毒科瘟病毒屬RNA病毒;BVDV分為1種血清型,2種生物型和3種基因型。該病毒主要引起牛腹瀉病、呼吸道疾病、生產(chǎn)性能下降等臨床癥狀。BVDV還嚴重影響與牛相關(guān)的生物制品,如凍精、血清、抗體、疫苗等,對畜牧業(yè)國家造成嚴重的經(jīng)濟損失。我國自1980年在吉林省長春地區(qū)檢測到BVDV病毒以來,全國感染動物陽性率逐年增加,最新數(shù)據(jù)顯示我國BVDV陽性率已達到46.7%,持續(xù)性感染率達2.2%,嚴重阻礙畜牧業(yè)發(fā)展。因此探索BVDV陽性動物檢測方法,消除BVDV傳染源,對減少生產(chǎn)損失是有實際意義的�；诖吮狙芯恐饕_展并完成了以下試驗:1.BVDV Erns和E2全長基因克隆及序列生物信息學分析MDBK細胞增殖BVDV病毒,然后提取病毒RNA;設計Erns和E2基因全長引物,RT-PCR擴增目的基因;基因克隆載體后菌落PCR驗證,最后測序,進行生物信息學分析。結(jié)果表明:試驗成功擴增681 bp Erns全長基因片段;生物信息學預測Erns基因序列編碼227... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

正常MDBK細胞Fig.2-1NormalMDBKcells

抗牛病毒性腹瀉病毒Erns蛋白單克隆抗體制備及鑒定17圖2-3BVDVRT-PCR擴增的瓊脂糖凝膠電泳Fig.2-3AgarosegelelectrophoresisamplifiedbyBVDVRT-PCRM：Mark；1：5’UTR擴增產(chǎn)物；2：鑒定引物擴增產(chǎn)物M:Mark;1:5"UTRAmplificationproducts;2:Identificationofprimeramplificationproducts2.3Erns、E2全長基因PCR擴增2.3.1Erns基因PCR產(chǎn)物及克隆PCR反應擴增得到特異性條帶，大小為681bp（圖2-4），與預期結(jié)果一致；菌液PCR鑒定結(jié)果均為681bp（圖2-5），選取3個陽性克隆送測序，結(jié)果表明所選3個克隆Erns基因序列一致；NCBIBLAST結(jié)果顯示擴增序列為BVDV-Ι型序列，相似度99%，證明試驗成功獲得Erns基因全長。圖2-4Erns全長基因PCR擴增的瓊脂糖凝膠電泳Fig.2-4AgarosegelelectrophoresiswithPCRamplificationofErnsfull-lengthgeneM：Mark；1：681bp擴增產(chǎn)物M:Mark;1:681bpamplificationproducts圖2-5Erns全長基因陽性克隆菌PCR擴增的瓊脂糖凝膠電泳Fig.2-5PCRamplificationoffull-lengthErnsgenepositiveclonesbyagarosegelelectrophoresisM：Mark；1-10：pMD19-T-ErnsPCR產(chǎn)物M:Mark;1-10:pMD19-T-ErnsPCRproducts

抗牛病毒性腹瀉病毒Erns蛋白單克隆抗體制備及鑒定17圖2-3BVDVRT-PCR擴增的瓊脂糖凝膠電泳Fig.2-3AgarosegelelectrophoresisamplifiedbyBVDVRT-PCRM：Mark；1：5’UTR擴增產(chǎn)物；2：鑒定引物擴增產(chǎn)物M:Mark;1:5"UTRAmplificationproducts;2:Identificationofprimeramplificationproducts2.3Erns、E2全長基因PCR擴增2.3.1Erns基因PCR產(chǎn)物及克隆PCR反應擴增得到特異性條帶，大小為681bp（圖2-4），與預期結(jié)果一致；菌液PCR鑒定結(jié)果均為681bp（圖2-5），選取3個陽性克隆送測序，結(jié)果表明所選3個克隆Erns基因序列一致；NCBIBLAST結(jié)果顯示擴增序列為BVDV-Ι型序列，相似度99%，證明試驗成功獲得Erns基因全長。圖2-4Erns全長基因PCR擴增的瓊脂糖凝膠電泳Fig.2-4AgarosegelelectrophoresiswithPCRamplificationofErnsfull-lengthgeneM：Mark；1：681bp擴增產(chǎn)物M:Mark;1:681bpamplificationproducts圖2-5Erns全長基因陽性克隆菌PCR擴增的瓊脂糖凝膠電泳Fig.2-5PCRamplificationoffull-lengthErnsgenepositiveclonesbyagarosegelelectrophoresisM：Mark；1-10：pMD19-T-ErnsPCR產(chǎn)物M:Mark;1-10:pMD19-T-ErnsPCRproducts

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[5]非洲豬瘟病毒p54重組蛋白的原核表達及其單克隆抗體制備[D]. 馮堯.揚州大學 2014
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[7]牛病毒性腹瀉病毒囊膜蛋白Erns/E2的原核表達及噬菌體展示anti-BVDV納米抗體文庫的構(gòu)建[D]. 肖紅冉.石河子大學 2013
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本文編號：3012283