腸外致病性大腸桿菌（Extraintestinal pathogenic Escherichia coli, ExPEC）是一類能引起人畜腸外組織與器官感染的重要人畜共患傳染病病原,可通過其特有的毒力因子（菌毛、粘附素、鐵相關(guān)蛋白等）侵襲并定植于腸外的不同組織與器官,誘發(fā)不同宿主產(chǎn)生腦膜炎,敗血癥與泌尿道感染等癥狀。隨著ExPEC對養(yǎng)豬業(yè)的危害以及相應(yīng)的全球醫(yī)療業(yè)上巨額的財(cái)政支出,并且發(fā)現(xiàn)ExPEC的危害甚至高于廣受關(guān)注的E.coli0157: H7,應(yīng)該受到公共衛(wèi)生意義上的廣泛關(guān)注。人們對ExPEC的認(rèn)識(shí)和研究越來越多,ExPEC可以通過食物源進(jìn)行傳播,飲用水與食物等污染可導(dǎo)致疾病的爆發(fā),嚴(yán)重者,可危及人和動(dòng)物的生命。對家畜業(yè)而言,該菌群能夠?qū)е录倚螽a(chǎn)生肺炎、腎炎、腦膜炎和敗血癥等病癥。ExPEC是誘發(fā)豬產(chǎn)生肺炎和新生兒腦膜炎等癥狀的重要致病因子之一細(xì)菌的許多分泌性蛋白和毒素都是通過分泌系統(tǒng)而被運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞體外或者直接運(yùn)輸?shù)剿拗骷?xì)胞體內(nèi),然后與宿主細(xì)胞相互作用而使分泌蛋白和毒素發(fā)揮毒性。目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少六種分泌系統(tǒng)（T1SS-T6SS）,而T6SS雖然是最近幾年發(fā)現(xiàn)的一種新型分泌系... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 大腸桿菌病原學(xué)
    1.2 腸外致病性大腸桿菌的流行病學(xué)以及危害
    1.3 ExPEC致病機(jī)理
        1.3.1 UPEC致病機(jī)理
        1.3.2 NMEC致病機(jī)理
    1.4 細(xì)菌分泌系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        1.4.1 分泌系統(tǒng)的概述
        1.4.2 T6SS的研究進(jìn)展
        1.4.3 T6SS的主要成分
    1.5 腸外致病性大腸桿菌的疫苗
2 研究目的和意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 質(zhì)粒、菌株和培養(yǎng)條件
        3.1.2 工具酶、試劑、試劑盒與主要儀器
        3.1.3 主要培養(yǎng)基及試劑配制
        3.1.4 主要溶液配制
        3.1.5 PCR引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.1.6 試驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞
    3.2 方法
2轉(zhuǎn)化法）">        3.2.1 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備（CaCl₂轉(zhuǎn)化法）
        3.2.2 細(xì)菌的增殖及腸外致病性大腸桿菌基因組的提取
        3.2.3 重組質(zhì)粒的小量提�。▔A裂解法）
        3.2.4 瓊脂糖凝膠回收
        3.2.5 PCR擴(kuò)增
        3.2.6 DNA與載體連接
2轉(zhuǎn)化法）">        3.2.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化（CaCl₂轉(zhuǎn)化法）
        3.2.8 重組質(zhì)粒的鑒定
        3.2.9 T6SS中vca0107基因前后臂片段的克隆與鑒定
        3.2.10 重組自殺性質(zhì)粒pRE△vca0107的構(gòu)建
        3.2.11 接合轉(zhuǎn)移與基因缺失株P(guān)CN033△vca0107的構(gòu)建
        3.2.12 缺失菌株生長特性的研究
        3.2.13 缺失菌株對小鼠的毒力試驗(yàn)及LD50的測定
        3.2.14 細(xì)胞粘附入侵實(shí)驗(yàn)
        3.2.15 細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)
4 結(jié)果與分析
    4.1 目的基因VCA0107的分析
    4.2 重組自殺性質(zhì)粒PRE△VCA0107的構(gòu)建
        4.2.1 vca0107基因上下游片段的擴(kuò)增與測序
        4.2.2 質(zhì)粒pSK△vca0107的構(gòu)建
        4.2.3 質(zhì)粒pRE△vca0107的構(gòu)建
    4.3 缺失株的篩選和鑒定
    4.4 突變株生長特性的研究
    4.5 缺失菌株對小鼠的毒力試驗(yàn)及LD50的測定
    4.6 EXPEC缺失突變株P(guān)CN033△VCA0107的粘附入侵能力
    4.7 EXPEC缺失突變株P(guān)CN033△VCA0107的抗吞噬能力
5 討論
    5.1 基因缺失株的生物學(xué)特性
    5.2 基因缺失株的篩選鑒定
    5.3 靶基因的選定以及下一步展望
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3010899