奶牛繁殖障礙是影響奶牛生產(chǎn)性能與經(jīng)濟效益的重要原因。在奶牛妊娠過程中,母體對胎兒的識別依賴于母胎界面組織相容性復合物（BoLA-I）的表達,這不僅影響著胚胎的正常著床,也影響著胎盤組織中相應免疫細胞的聚集、細胞因子的分泌,對維持妊娠和動物分娩都具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。由于胎盤血管重塑及生長需要一定時間,因此胚胎在早期附植期間均處于缺氧環(huán)境中；隨著滋養(yǎng)層細胞不斷的侵襲,胎盤血管網(wǎng)逐漸建立起來,保證了胚胎的供氧,營養(yǎng)物質(zhì)以及代謝產(chǎn)物在母體與胎兒之間進行正常交換。缺氧誘導因子（HIF）在缺氧狀態(tài)下對血管形成的相關因子具有特異性的調(diào)節(jié)作用。HIF通過調(diào)節(jié)大量靶基因的表達,繼而調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細胞侵潤,血管重塑以及母體與胎兒血氧平衡過程。大量研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α的表達是細胞缺氧的特異性標示物,而二氯化鈷（CoCl2）可以作為一種誘導劑與HIF-1α中的氧依賴降解區(qū)（ODD）結合來誘發(fā)細胞缺氧,從而建立體外培養(yǎng)細胞缺氧模型。本試驗首先利用CoCl2作用于體外培養(yǎng)奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞（EEC）,建立了濃度-時間CoCh缺氧模型；采用熒光定量PCR檢測不同缺氧狀態(tài)下BoLA-A與MIC1的表達；將實驗室已制... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
1 前言
    1.1 BoLA-I研究進展
        1.1.1 BoLA-A的結構與功能
        1.1.2 MIC1的結構和功能
        1.1.3 BoLA-I與奶牛妊娠免疫
    1.2 缺氧環(huán)境與妊娠的關系
        1.2.1 妊娠初期缺氧形成的原因
        1.2.2 缺氧與HIF的關系
        1.2.3 HIF與妊娠的關系
    1.3 二氯化鈷與缺氧的關系
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗動物
        2.1.2 試驗主要儀器設備
        2.1.3 試驗主要試劑
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞樣品的采集及預處理
        2.2.2 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞體外原代培養(yǎng)
        2.2.3 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞傳代培養(yǎng)及鑒定
        2.2.4 細胞凍存
        2.2.5 細胞計數(shù)
2細胞缺氧模型的建立">        2.2.6 CoCl₂細胞缺氧模型的建立
        2.2.7 實時熒光定量PCR
        2.2.8 Western Blot檢測
    2.9 統(tǒng)計學分析
3 實驗結果與分析
    3.1 細胞培養(yǎng)結果
        3.1.1 細胞原代培養(yǎng)
        3.1.2 細胞傳代培養(yǎng)及免疫組化鑒定
    3.2 細胞缺氧模型建立結果
2作用下細胞死亡率">        3.2.1 MTT法檢測不同時間濃度CoCl₂作用下細胞死亡率
2建立細胞缺氧模型方案確定">        3.2.2 COCl₂建立細胞缺氧模型方案確定
    3.3 熒光定量PCR結果
        3.3.1 細胞總RNA提取結果
        3.3.2 cDNA擴增產(chǎn)物回收結果
        3.3.3 實時熒光定量PCR結果
    3.4 Western Blot結果
        3.4.1 BoLA-A蛋白檢測結果
        3.4.2 MIC1蛋白檢測結果
4 討論
    4.1 細胞缺氧模型的建立
    4.2 缺氧對奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞上BoLA-A與MIC1表達的影響
5 結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3010862