奶牛繁殖障礙是影響奶牛生產(chǎn)性能與經(jīng)濟(jì)效益的重要原因。在奶牛妊娠過(guò)程中,母體對(duì)胎兒的識(shí)別依賴于母胎界面組織相容性復(fù)合物（BoLA-I）的表達(dá),這不僅影響著胚胎的正常著床,也影響著胎盤組織中相應(yīng)免疫細(xì)胞的聚集、細(xì)胞因子的分泌,對(duì)維持妊娠和動(dòng)物分娩都具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。由于胎盤血管重塑及生長(zhǎng)需要一定時(shí)間,因此胚胎在早期附植期間均處于缺氧環(huán)境中；隨著滋養(yǎng)層細(xì)胞不斷的侵襲,胎盤血管網(wǎng)逐漸建立起來(lái),保證了胚胎的供氧,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及代謝產(chǎn)物在母體與胎兒之間進(jìn)行正常交換。缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）在缺氧狀態(tài)下對(duì)血管形成的相關(guān)因子具有特異性的調(diào)節(jié)作用。HIF通過(guò)調(diào)節(jié)大量靶基因的表達(dá),繼而調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵潤(rùn),血管重塑以及母體與胎兒血氧平衡過(guò)程。大量研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α的表達(dá)是細(xì)胞缺氧的特異性標(biāo)示物,而二氯化鈷（CoCl2）可以作為一種誘導(dǎo)劑與HIF-1α中的氧依賴降解區(qū)（ODD）結(jié)合來(lái)誘發(fā)細(xì)胞缺氧,從而建立體外培養(yǎng)細(xì)胞缺氧模型。本試驗(yàn)首先利用CoCl2作用于體外培養(yǎng)奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞（EEC）,建立了濃度-時(shí)間CoCh缺氧模型；采用熒光定量PCR檢測(cè)不同缺氧狀態(tài)下BoLA-A與MIC1的表達(dá)；將實(shí)驗(yàn)室已制... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 BoLA-I研究進(jìn)展
        1.1.1 BoLA-A的結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.2 MIC1的結(jié)構(gòu)和功能
        1.1.3 BoLA-I與奶牛妊娠免疫
    1.2 缺氧環(huán)境與妊娠的關(guān)系
        1.2.1 妊娠初期缺氧形成的原因
        1.2.2 缺氧與HIF的關(guān)系
        1.2.3 HIF與妊娠的關(guān)系
    1.3 二氯化鈷與缺氧的關(guān)系
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備
        2.1.3 試驗(yàn)主要試劑
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞樣品的采集及預(yù)處理
        2.2.2 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞體外原代培養(yǎng)
        2.2.3 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)及鑒定
        2.2.4 細(xì)胞凍存
        2.2.5 細(xì)胞計(jì)數(shù)
2細(xì)胞缺氧模型的建立">        2.2.6 CoCl₂細(xì)胞缺氧模型的建立
        2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.8 Western Blot檢測(cè)
    2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果
        3.1.1 細(xì)胞原代培養(yǎng)
        3.1.2 細(xì)胞傳代培養(yǎng)及免疫組化鑒定
    3.2 細(xì)胞缺氧模型建立結(jié)果
2作用下細(xì)胞死亡率">        3.2.1 MTT法檢測(cè)不同時(shí)間濃度CoCl₂作用下細(xì)胞死亡率
2建立細(xì)胞缺氧模型方案確定">        3.2.2 COCl₂建立細(xì)胞缺氧模型方案確定
    3.3 熒光定量PCR結(jié)果
        3.3.1 細(xì)胞總RNA提取結(jié)果
        3.3.2 cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物回收結(jié)果
        3.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果
    3.4 Western Blot結(jié)果
        3.4.1 BoLA-A蛋白檢測(cè)結(jié)果
        3.4.2 MIC1蛋白檢測(cè)結(jié)果
4 討論
    4.1 細(xì)胞缺氧模型的建立
    4.2 缺氧對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞上BoLA-A與MIC1表達(dá)的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]缺氧對(duì)胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的影響[J]. 趙海君,張園,高玲玲,高超,崔毓桂,劉嘉茵.  江蘇醫(yī)藥. 2012(19)
[2]胰腺癌組織HIF-1α和MICA/B的表達(dá)及意義[J]. 陸曄斌,孫維佳,胡娟娟,王志明.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2012(07)
[3]二氯化鈷化學(xué)缺氧對(duì)細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡及侵潤(rùn)的影響[J]. 吳媛媛,劉海意,喬福元.  生殖與避孕. 2009(06)
[4]體外培養(yǎng)Schwann細(xì)胞缺氧模型的建立[J]. 朱浩,丁文龍,王文進(jìn),李鋒.  解剖學(xué)雜志. 2008(02)
[5]缺氧對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞VEGF分泌與基因表達(dá)調(diào)控作用的研究[J]. 劉海意,喬福元,劉玉凌,龔洵,吳媛媛.  現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展. 2008(03)
[6]大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞體外缺糖缺氧模型制備方法的改進(jìn)[J]. 田映紅,李樹(shù)基,李曉文,高天明.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(15)
[7]不同缺氧方法誘導(dǎo)BeWo細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子 1α表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 吳維光,陳亞瓊,王玉萍,張明靜.  武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2005(02)
[8]圍生期缺氧缺血后腦組織型纖溶酶原激活物的活性變化[J]. 徐劍文,張更,王瑋,康仲涵,趙小貞.  實(shí)用兒科臨床雜志. 2002(05)
[9]連二亞硫酸鈉致PC12和NG108-15細(xì)胞擬缺血損傷研究[J]. 劉娜,左萍萍,周帆,張放,劉景生,任民峰.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 1998(06)

博士論文
[1]血紅素氧合酶/一氧化碳系統(tǒng)在妊娠期高血壓疾病患者發(fā)病機(jī)制中作用的研究[D]. 郭鈺珍.華中科技大學(xué) 2006

碩士論文
[1]IFN-τ調(diào)控奶牛子宮上皮細(xì)胞表達(dá)MICB及BoLA-A的研究[D]. 吳岳.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]低氧應(yīng)答對(duì)妊娠期高血壓疾病病理胎盤形成的影響[D]. 郭倩.第四軍醫(yī)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3010862