無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）是導(dǎo)致奶牛乳房炎的主要病原菌之一,屬高度接觸性傳染的專性乳腺寄生菌,易引起隱性乳房炎,可導(dǎo)致持續(xù)性感染且很難自愈,給奶牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。無乳鏈球菌在人類醫(yī)學(xué)上稱B群鏈球菌（Group B Streptococci, GBS）,是一種對(duì)新生兒有生命威脅的常見菌,而如今人源和動(dòng)物源無乳鏈球菌耐藥現(xiàn)象都很嚴(yán)重；研究發(fā)現(xiàn),無乳鏈球的部分毒力因子在其致病過程中發(fā)揮著重要作用。故本論文對(duì)3個(gè)奶牛場(chǎng)隱性乳房炎的致病菌進(jìn)行了分離、鑒定和耐藥性分析,選擇無乳鏈球菌分離株的毒力因子BibA蛋白進(jìn)行了體外表達(dá)和純化研究,旨在為無乳鏈球菌免疫學(xué)檢測(cè)方法的建立或無乳鏈球菌亞單位疫苗的研究提供技術(shù)資料。（1）利用16S rDNA序列分析方法結(jié)合細(xì)菌形態(tài)和生化特性分析,分離鑒定了3個(gè)奶牛場(chǎng)隱性乳房炎的主要致病菌,包括大腸桿菌、腸球菌、無乳鏈球和金黃色葡萄球菌等；對(duì)分離的無乳鏈球菌進(jìn)行了血清型鑒定和耐藥性分析,結(jié)果顯示分離的無乳鏈球菌血清型為1a型,對(duì)青霉素、鏈霉素等常用抗生素耐藥,對(duì)紅霉素、四環(huán)素等抗生素較為敏感。（2）選擇分離于臨床的無乳鏈球菌... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 無乳鏈球菌與致病機(jī)制相關(guān)的毒力因子研究進(jìn)展
        1.1.1 孔毒素
        1.1.2 促進(jìn)免疫逃避的因子
        1.1.3 粘附因子
    1.2 本研究的目的和意義
第二章 奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定及無乳鏈球菌的耐藥性分析
    2.1 材料
        2.1.1 牛乳收集
        2.1.2 主要試劑及材料
        2.1.3 溶液的配制
        2.1.4 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 隱性乳房炎的檢測(cè)及牛乳的收集
        2.2.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)菌的DNA提取
        2.2.4 細(xì)菌16SrDNA擴(kuò)增
        2.2.5 無乳鏈球菌的血清型鑒定
        2.2.6 無乳鏈球菌的的藥物敏感性試驗(yàn)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 細(xì)菌的分離鑒定
        2.3.2 無乳鏈球菌的血清型鑒定
        2.3.3 無乳鏈球菌的藥物敏感性實(shí)驗(yàn)
    2.4 討論
        2.4.1 細(xì)菌的分離鑒定
        2.4.2 無乳鏈球菌的耐藥試驗(yàn)
第三章 無乳鏈球菌BIBA基因的克隆及序列分析
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 主要試劑及材料
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 BibA基因的PCR擴(kuò)增
        3.2.3 目的基因的克隆與鑒定
        3.2.4 BibA基因片段的生物信息學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 BibA基因的克隆與鑒定
        3.3.2 BibA基因的生物信息學(xué)分析
    3.4 討論
第四章 BIBA蛋白的表達(dá)與純化
    4.1 材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 主要試劑及材料
        4.1.3 試劑的配置
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.2 工程菌的構(gòu)建
        4.2.3 BibA蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.4 誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
        4.2.5 蛋白的純化與復(fù)性
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        4.3.2 BibA原核表達(dá)的可溶性分析
        4.3.3 目的蛋白的檢測(cè)
        4.3.4 表達(dá)條件的優(yōu)化
        4.3.5 蛋白的純化與復(fù)性
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Ⅰa型和Ⅱ型牛源無乳鏈球菌sip基因的遺傳進(jìn)化分析[J]. 王旭榮,張世棟,楊峰,王國(guó)慶,楊志強(qiáng),李建喜,李宏勝.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2012(09)
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[3]2型豬鏈球菌層粘連蛋白結(jié)合蛋白的原核表達(dá)及免疫原性檢測(cè)[J]. 潘秀珍,邵珠卿,李先富,劉文靜,王長(zhǎng)軍,唐家祺.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2011(07)
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[5]蛋白質(zhì)電泳考馬斯亮藍(lán)G250染色方法改良[J]. 汪靜,袁琳,陳曉明.  醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2006(06)
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碩士論文
[1]B群鏈球菌表面蛋白FbsA的提取及免疫原性初步探討[D]. 張學(xué)峰.北京生物制品研究所 2008



本文編號(hào)：3008907