本文關(guān)鍵詞：新疆伊犁地區(qū)馬皰疹病毒1型的分離鑒定及其gB和gD基因的序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：馬皰疹病毒1型(Equine herpesvirses 1,EHV-1)屬于α皰疹病毒亞科的成員。馬屬動物感染本病毒后其臨床表現(xiàn)以流產(chǎn)、急性呼吸道疾病、共濟(jì)失調(diào)和病毒血癥等典型特征。馬鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis,ER)在我國廣泛存在且嚴(yán)重威脅著馬匹健康發(fā)展,造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究旨在從新疆伊犁地區(qū)疑似馬鼻肺炎病例中分離和鑒定EHV-1流行株,為新疆馬鼻肺炎的流行病學(xué)調(diào)查和疫苗研制奠定基礎(chǔ)。本研究從新疆伊犁地區(qū)疑似馬鼻肺炎孕馬的流產(chǎn)胎兒中采集肺組織,將肺組織勻漿液分別接種BHK-21和MDBK細(xì)胞,同時分別采用病原學(xué)、血清學(xué)和分子生物方法對分離的病毒進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示,勻漿液接種細(xì)胞48 h后,細(xì)胞出現(xiàn)典型的圓縮、融合、脫落和聚堆成葡萄串狀等致細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE);聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)擴(kuò)增一條622 bp的特異性條帶;PCR擴(kuò)增產(chǎn)物核酸序列與GenBank中EHV-1(GenBank登錄號:KF644579.1)gB基因的同源性為100%;病毒滴度TCID50為105.8/0.1 mL;經(jīng)理化特性測定該病毒不耐酸,不耐熱,對紫外、氯仿和乙醚處理敏感;經(jīng)透射電鏡觀察該病毒顆粒為圓形,有囊膜,直徑約為130 nm;中和試驗(yàn)顯示,EHV-1標(biāo)準(zhǔn)陽性血清能夠中和分離毒株,能抑制病毒引起的CPE,EHV-1陽性血清的中和效價為l:24;間接免疫熒光試驗(yàn)顯示,接毒細(xì)胞出現(xiàn)特異性的綠色熒光。因此,本研究成功分離得到馬皰疹病毒1型病毒株,并將其命名為EHV-1-XJ2015株。為進(jìn)一步研究該分離毒株的部分基因組成及生物學(xué)功能等信息,本研究利用特異性引物分別擴(kuò)增分離毒株的gB、gD基因,將其克隆至pMD19-T載體中,篩選陽性克隆,進(jìn)行核酸序列測定;同時,采用生物信息學(xué)軟件分別對gB與gD基因的核酸同源性和遺傳性進(jìn)行分析,并預(yù)測其編碼蛋白的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示,EHV-1-XJ2015分離株屬于EHV-1;gB和gD核酸的保守性較好,各分離株之間變異較小。通過對該毒株gB和gD基因的序列分析,為常規(guī)疫苗和基因工程疫苗候選株的篩選提供技術(shù)支撐。
【關(guān)鍵詞】：馬皰疹病毒1型 分離鑒定 gB基因 gD基因 序列分析
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文縮略表7-8
• 第1章 緒論8-18
• 1.1 生物學(xué)特性8-11
• 1.2 病毒的流行病學(xué)11-12
• 1.3 病毒的致病機(jī)理12
• 1.4 病毒的分離鑒定12-15
• 1.5 疫苗的研究及現(xiàn)狀15-16
• 1.6 研究目的和意義16-18
• 第2章 新疆伊犁馬皰疹病毒1型的分離與鑒定18-35
• 2.1 材料18-19
• 2.2 方法19-25
• 2.3 結(jié)果25-33
• 2.4 討論33-35
• 第3章 馬皰疹病毒1型gB和gD基因的克隆測序及其序列分析35-53
• 3.1 材料35-36
• 3.2 方法36-42
• 3.3 結(jié)果42-51
• 3.4 討論51-53
• 全文結(jié)論53-54
• 附錄54-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 致謝63-64
• 作者簡介64

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本文編號：300789