黑曲霉（Aspergillus niger）是工業(yè)上常用于異源蛋白表達(dá)的生產(chǎn)菌株。鐮孢霉（Fusarium venenatum） ATCC20334是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種具有高效表達(dá)蛋白能力的絲狀真菌。豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）是一種能夠引起哺乳仔豬急性腹瀉的豬流感病毒,而其coe基因編碼的糖蛋白能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。本研究探索分別以黑曲霉ATCC1015和鐮孢霉ATCC20334為表達(dá)宿主對(duì)coe基因進(jìn)行異源表達(dá)進(jìn)而構(gòu)建疫苗表達(dá)系統(tǒng)。本論文主要研究結(jié)果如下：（1）分別比較鐮孢霉、黑曲霉和米曲霉分泌的背景蛋白及蛋白酶活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相比于黑曲霉和米曲霉,鐮孢霉分泌較少的背景蛋白。而且,鐮孢霉胞外分泌的蛋白酶活性顯著低于黑曲霉和米曲霉的胞外蛋白酶活性。（2）利用顯微鏡分別觀察黑曲霉和鐮孢霉菌株在YPD和Vogel’s培養(yǎng)基里的發(fā)酵形態(tài)。觀察結(jié)果顯示黑曲霉的菌絲呈致密的球狀,鐮孢霉的菌體呈分散的菌絲體,而這更有利于胞外蛋白的分泌。同時(shí)顯示黑曲霉或鐮孢霉在YPD和Vogel’s培養(yǎng)基里的發(fā)酵形態(tài)一致。（3）應(yīng)用基因工程技... 

【文章來源】：天津科技大學(xué)天津市

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＰＥＤＶ病毒粒子結(jié)構(gòu)模式圖??

天津科技大學(xué)碩±學(xué)位論文整新鮮抱子的懸液抱子液濃度為１０６個(gè)／１１止，�。玻埃�?＾１１＾涂布０、５、１０、１５ｐ皆ｍＬ）的ＰＤＡ培養(yǎng)基上。??Ｃ培養(yǎng)２ｄ、３ｄ、４ｄ后觀察菌落生長情況，確定潮霉素Ｂ對(duì)粒?ｐＦＧＬ巧－ＰｇｐｄＡ－Ｔｔｒｐｃ（ｐＬＨ５。的構(gòu)建??，ＷｐＦＧＬ５９ＰＷ為出發(fā)質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體，ＰＦＧＬ５９質(zhì)粒含抗性基因，分別作為大腸桿菌和絲狀真菌的篩選標(biāo)記。ｐＦＧＬ５復(fù)制起始位點(diǎn)，使其在大腸桿菌中可穩(wěn)定存在并具有高拷Ｗ在根癌農(nóng)桿菌中穩(wěn)定的自我復(fù)制并分配到子代細(xì)胞中。該區(qū)，其作為外源基因的載體可Ｗ從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并通過ｃｏｍｂ?ｉｍ化ｎ）穩(wěn)定的整合到受體基因組。??－Ｋｐｎ?Ｉ??

?基因ｃｏｅ根據(jù)黒曲霉密碼子偏好性優(yōu)化后命名為＾ｃｏｃｏｅ，ｃｏｅ與ｖ４ｃｏｃｏｅ的堿基對(duì)??比結(jié)果見圖２－２，ＣＡＩ由原先的０．７９提升至０．９８，優(yōu)化ｃｏｅ堿基ＧＣ含量和稀有密碼??子＾＾延長ｍＲＮＡ的表達(dá)，打破影響核糖體結(jié)合和１１１１。＇１八穩(wěn)定性的Ｓｔｅｎ＞Ｌｏｏｐ結(jié)構(gòu)，??同時(shí)ＦＯＤ的值也有顯著的提局。??ｍｉｕｎｉ?Ｖ．．；．?？．?－?並；．１??Ａｆｔ＇壇；巧接〇＇徑ｒｗ?Ｏｐｉ；ｍ這斯紛；?Ｉ??ｙ王勞舞葦巧可＂ｖ＊＊，電爭穿．＊？＾畫艙叩化執(zhí)�；�?＞賊；＇滬專賴辛．Ｗ當(dāng)譽(yù)卷｜｜＊＾謝￣??Ｐ歸：ｊ：：：：�。簦海海海海郏欤簦海欤海海含F(xiàn)?１�。矗�?Ｐ畫?｜｜｜｜謬｜：｜襲畫齡辭哪：：：Ｉ??吏?—＂■—？＊＊＊＞－＊－＇＊＇＊＇＊＊＊＊＊＊＊￣￣＊＊＊＊一＊＇＊＇＜＿＿＊?—?？＿＿？＊＿＊＊＊？＞?＾?６〇?＊?￣?４?４?￣?￣?？＇Ｉ＊?＊?＂ｔ?ｆｉ?＊Ｉ＊Ｆ?－??ｇ妖－＃ｗ—?三於！????■＾？—ＩＩ－—??——￡————�。辏摺�??＊■（絲＾?＊５?Ｉ??????—??－?然會(huì)?？寺?＊＊■－＞＞■＊＊？??巧?？＞＞？？＃．?？々ａ＊ｗｖ＞ｗ？?會(huì)？？．?？？？９Ｗ４Ｋ９？１？ＷＷ？?—?？－?－？？■＊？？？■？？？??今＂凝—＇瘋…―堿＾＾？從獻(xiàn)＇游「

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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