黑曲霉（Aspergillus niger）是工業(yè)上常用于異源蛋白表達的生產菌株。鐮孢霉（Fusarium venenatum） ATCC20334是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種具有高效表達蛋白能力的絲狀真菌。豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）是一種能夠引起哺乳仔豬急性腹瀉的豬流感病毒,而其coe基因編碼的糖蛋白能夠誘導機體產生中和抗體。本研究探索分別以黑曲霉ATCC1015和鐮孢霉ATCC20334為表達宿主對coe基因進行異源表達進而構建疫苗表達系統(tǒng)。本論文主要研究結果如下：（1）分別比較鐮孢霉、黑曲霉和米曲霉分泌的背景蛋白及蛋白酶活性。實驗結果表明相比于黑曲霉和米曲霉,鐮孢霉分泌較少的背景蛋白。而且,鐮孢霉胞外分泌的蛋白酶活性顯著低于黑曲霉和米曲霉的胞外蛋白酶活性。（2）利用顯微鏡分別觀察黑曲霉和鐮孢霉菌株在YPD和Vogel’s培養(yǎng)基里的發(fā)酵形態(tài)。觀察結果顯示黑曲霉的菌絲呈致密的球狀,鐮孢霉的菌體呈分散的菌絲體,而這更有利于胞外蛋白的分泌。同時顯示黑曲霉或鐮孢霉在YPD和Vogel’s培養(yǎng)基里的發(fā)酵形態(tài)一致。（3）應用基因工程技... 

【文章來源】：天津科技大學天津市

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＰＥＤＶ病毒粒子結構模式圖??

天津科技大學碩±學位論文整新鮮抱子的懸液抱子液濃度為１０６個／１１止，�。玻埃�?＾１１＾涂布０、５、１０、１５ｐ皆ｍＬ）的ＰＤＡ培養(yǎng)基上。??Ｃ培養(yǎng)２ｄ、３ｄ、４ｄ后觀察菌落生長情況，確定潮霉素Ｂ對粒?ｐＦＧＬ巧－ＰｇｐｄＡ－Ｔｔｒｐｃ（ｐＬＨ５。的構建??，ＷｐＦＧＬ５９ＰＷ為出發(fā)質粒構建表達載體，ＰＦＧＬ５９質粒含抗性基因，分別作為大腸桿菌和絲狀真菌的篩選標記。ｐＦＧＬ５復制起始位點，使其在大腸桿菌中可穩(wěn)定存在并具有高拷Ｗ在根癌農桿菌中穩(wěn)定的自我復制并分配到子代細胞中。該區(qū)，其作為外源基因的載體可Ｗ從農桿菌中轉移并通過ｃｏｍｂ?ｉｍ化ｎ）穩(wěn)定的整合到受體基因組。??－Ｋｐｎ?Ｉ??

?基因ｃｏｅ根據(jù)黒曲霉密碼子偏好性優(yōu)化后命名為＾ｃｏｃｏｅ，ｃｏｅ與ｖ４ｃｏｃｏｅ的堿基對??比結果見圖２－２，ＣＡＩ由原先的０．７９提升至０．９８，優(yōu)化ｃｏｅ堿基ＧＣ含量和稀有密碼??子＾＾延長ｍＲＮＡ的表達，打破影響核糖體結合和１１１１。＇１八穩(wěn)定性的Ｓｔｅｎ＞Ｌｏｏｐ結構，??同時ＦＯＤ的值也有顯著的提局。??ｍｉｕｎｉ?Ｖ．．；．?？．?－?並；．１??Ａｆｔ＇壇；巧接〇＇徑ｒｗ?Ｏｐｉ；ｍ這斯紛；?Ｉ??ｙ王勞舞葦巧可＂ｖ＊＊，電爭穿．＊？＾畫艙叩化執(zhí)專化巧?＞賊；＇滬專賴辛．Ｗ當譽卷｜｜＊＾謝￣??Ｐ歸：ｊ：：：：�。簦海海海海郏欤簦海欤海海含F(xiàn)?１！４：?Ｐ畫?｜｜｜｜謬｜：｜襲畫齡辭哪：：：Ｉ??吏?—＂■—？＊＊＊＞－＊－＇＊＇＊＇＊＊＊＊＊＊＊￣￣＊＊＊＊一＊＇＊＇＜＿＿＊?—?？＿＿？＊＿＊＊＊？＞?＾?６〇?＊?￣?４?４?￣?￣?？＇Ｉ＊?＊?＂ｔ?ｆｉ?＊Ｉ＊Ｆ?－??ｇ妖－＃ｗ—?三於！????■＾？—ＩＩ－—??——￡————！．ｊ＿—??＊■（絲＾?＊５?Ｉ??????—??－?然會?？寺?＊＊■－＞＞■＊＊？??巧?？＞＞？？＃．?？々ａ＊ｗｖ＞ｗ？?會？？．?？？？９Ｗ４Ｋ９？１？ＷＷ？?—?？－?－？？■＊？？？■？？？??今＂凝—＇瘋…―堿＾＾？從獻＇游「

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3005585