豬瘟分布于是世界各地,在國(guó)內(nèi)廣泛流行,給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。長(zhǎng)期的疫苗使用,造成病毒發(fā)生變異,呈現(xiàn)多種病型的發(fā)生。豬瘟病毒建立了一種逃避宿主先天性免疫系統(tǒng)識(shí)別的策略,免疫系統(tǒng)不能識(shí)別非自我元件而導(dǎo)致免疫耐受,造成豬的持續(xù)性感染。豬瘟病毒E吣蛋白能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體,在病毒的持續(xù)性感染和抗病毒應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮重要功能作用,NS4A、NS4B、NS5A參與病毒RNA的復(fù)制過(guò)程,四種蛋白Erns、NS4A、NS4B和NS5A在對(duì)宿主的致病過(guò)程中扮演著重要角色,研制豬瘟病毒各種蛋白的抗體有助于對(duì)病毒蛋白的結(jié)構(gòu)與功能的深入探討,因此本研究通過(guò)制備結(jié)構(gòu)蛋白Erns和非結(jié)構(gòu)蛋白NS4A、NS4B和NS5A的多克隆抗體,進(jìn)一步探索感染細(xì)胞中豬瘟病毒Erns、NS4A、NS4B、NS5A蛋白與宿主的相互作用關(guān)系。本文克隆了Erns、NS4A、NS4B△205-347、NS5A基因,將這些基因插入原核表達(dá)載體PET-32a（+）克隆位點(diǎn),成功構(gòu)建了PET-Erns、PET-NS4A. PET-NS4B△205-347、PET-NS5A重組原核表達(dá)質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL-21或BL一21衍生菌并進(jìn)行IP... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬瘟病毒的分類(lèi)及其結(jié)構(gòu)特性
    1.2 豬瘟病毒的致病機(jī)理研究
        1.2.1 免疫抑制
        1.2.2 免疫逃避
        1.2.3 出血機(jī)制
    1.3 豬瘟病毒基因組結(jié)構(gòu)及其功能蛋白的特性
        1.3.1 CSFV的非編碼區(qū)
        1.3.2 CSFV的非結(jié)構(gòu)蛋白
        1.3.3 CSFV的結(jié)構(gòu)蛋白
rns的研究進(jìn)展">    1.4 非結(jié)構(gòu)蛋白NS4A、NS4B和NS5A及結(jié)構(gòu)蛋白E^rns的研究進(jìn)展
        1.4.1 NS4A蛋白
        1.4.2 NS4B蛋白
        1.4.3 NS5A蛋白
rns蛋白">        1.4.5 E^rns蛋白
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒、細(xì)胞、質(zhì)粒與菌株
        2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 引物及載體構(gòu)建策略
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 試劑
        2.1.6 試劑配制
        2.1.7 感受態(tài)細(xì)胞的制備
    2.2 技術(shù)路線
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 基因的克隆
        2.3.2 構(gòu)建原核表達(dá)載體
        2.3.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.4 純化重組蛋白
        2.3.5 免疫小白鼠制備多抗血清
        2.3.6 多克隆抗體的特異性
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 總體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及所用引物
rns蛋白的原核表達(dá)及多抗的制備">    3.2 豬瘟病毒E^rns蛋白的原核表達(dá)及多抗的制備
rns表達(dá)區(qū)域的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列">        3.2.1 E^rns表達(dá)區(qū)域的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列
rns基因的克隆">        3.2.2 豬瘟病毒E^rns基因的克隆
rns基因的原核表達(dá)載體">        3.2.3 構(gòu)建E^rns基因的原核表達(dá)載體
rns重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)">        3.2.4 E^rns重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
rns重組蛋白表達(dá)形式的鑒定與純化">        3.2.5 E^rns重組蛋白表達(dá)形式的鑒定與純化
rns重組蛋白">        3.2.6 Western Blot鑒定E^rns重組蛋白
rns多克隆抗體與純化的重組蛋白的反應(yīng)性">        3.2.7 抗E^rns多克隆抗體與純化的重組蛋白的反應(yīng)性
rns多克隆抗體與CSFV感染PK-15細(xì)胞中E^rns蛋白的反應(yīng)性">        3.2.8 抗E^rns多克隆抗體與CSFV感染PK-15細(xì)胞中E^rns蛋白的反應(yīng)性
    3.3 豬瘟病毒NS4A蛋白的原核表達(dá)及多抗的制備
        3.3.1 NS4A表達(dá)區(qū)域的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列
        3.3.2 豬瘟病毒NS4A基因的克隆
        3.3.3 構(gòu)建NS4A基因的原核表達(dá)載體
        3.3.4 原核表達(dá)載體PET-NS4A的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.3.5 NS4A重組蛋白表達(dá)形式的鑒定與純化
        3.3.6 Western Blot鑒定NS4A重組蛋白
        3.3.7 抗NS4A多克隆抗體與NS4A重組蛋白的反應(yīng)性
        3.3.8 抗NS4A多克隆抗體與CSFV感染的PK-15細(xì)胞中NS4A蛋白的反應(yīng)性
    3.4 豬瘟病毒NS4B蛋白的原核表達(dá)及多抗的制備
        3.4.1 NS4B表達(dá)區(qū)域的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列分析
        3.4.2 豬瘟病毒NS4B基因的克隆
        3.4.3 構(gòu)建NS4B基因的原核表達(dá)載體
        3.4.4 誘導(dǎo)NS4B基因原核表達(dá)載體表達(dá)蛋白
        3.4.5 NS4BΔ205-347重組蛋白的純化及鑒定
        3.4.6 Western Blot鑒定NS4BΔ205-347重組蛋白
        3.4.7 抗NS4BΔ205-347多克隆抗體與重組蛋白的反應(yīng)性
        3.4.8 抗NS4BΔ205-347多克隆抗體與真核表達(dá)NS4B蛋白的反應(yīng)性
        3.4.9 抗NS4BzΔ205-347多克隆抗體與CSFV感染PK-15細(xì)胞中NS4B蛋白的反應(yīng)性
    3.5 豬瘟病毒NS5A蛋白的原核表達(dá)及多抗的制備
        3.5.1 NS5A表達(dá)區(qū)域的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列
        3.5.2 豬瘟病毒NS5A基因的克隆
        3.5.3 構(gòu)建NS5A基因的原核表達(dá)載體
        3.5.4 原核表達(dá)載體PET-NS5A的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.5.5 NS5A蛋白表達(dá)形式的鑒定及純化
        3.5.6 NS5A重組蛋白的Western Blot分析
        3.5.7 抗NS5A多克隆抗體與重組蛋白的反應(yīng)性
        3.5.8 抗NS5A多克隆抗體與PK-15細(xì)胞中真核表達(dá)的NS5A蛋白的反應(yīng)性
        3.5.9 抗NS5A多克隆抗體與CSFV感染PK-15細(xì)胞中NS5A蛋白的反應(yīng)性
第四章 討論
    4.1 免疫原的選擇
rns、NS4A、NS4B、NS5A的原核表達(dá)策略">    4.2 豬瘟病毒E^rns、NS4A、NS4B、NS5A的原核表達(dá)策略
    4.3 可溶性抗原的制備
    4.4 多克隆抗體的反應(yīng)性和特異性
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國(guó)豬瘟流行現(xiàn)狀與防控措施建議[J]. 姚文生,范學(xué)政,王琴,寧宜寶.  中國(guó)獸藥雜志. 2011(09)
[2]豬瘟病毒NS3蛋白的重組表達(dá)及其單克隆抗體的制備[J]. 常天明,孫元,李宏宇,賀番,李淼,黃俊華,仇華吉.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2010(02)
[3]牛病毒性腹瀉病毒基因組結(jié)構(gòu)與蛋白功能研究進(jìn)展[J]. 范進(jìn)江,薄新文,鐘發(fā)剛.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(05)



本文編號(hào)：3003893