大腸桿菌是一類常見的人畜共患病病原菌。臨床上分為腸內致病菌、腸外致病菌和共生菌三類。對于禽類而言,大腸桿菌可作為腸道內正常菌群存在,或存在于宿主粘膜表面。只有那些具有特定毒力特征且引起發(fā)病的菌株被認定為禽致病性大腸桿菌,它是家禽最常見的病原菌之一,大多引起腸道外感染,主要表現(xiàn)為呼吸道或全身性感染,引起一系列疾病最終引起死亡,造成嚴重的經濟損失,同時大腸桿菌病還受環(huán)境及機體因素誘發(fā)產生。目前該病已躋身為危害養(yǎng)禽業(yè)的細菌性疾病之首。為了解雞大腸桿菌的流行病學特點,本研究對武漢周邊8個地區(qū)雞大腸桿菌進行分離鑒定,通過血清分型、耐藥表型、群系鑒定及毒力因子分析確定優(yōu)勢血清型的強毒菌株ACN003,并缺失其毒力基因iucB。本研究主要內容如下：一.雞致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性等特性的研究1.自武漢周邊雞場送檢的發(fā)病雞中分離得到45株細菌。經糖發(fā)酵試驗、IMVIC試驗等生化試驗及培養(yǎng)特性觀察,證實獲得的45株細菌為大腸桿菌。生化試驗表明：45株菌均能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蜜二糖、山梨醇、甘露醇,不分解肌醇、纖維二糖、阿拉伯醇,部分菌株可分解衛(wèi)矛醇、山梨糖、棉子糖、鼠李糖、蔗糖等。所有分得... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表 （abbreviation）
第一章 前言
    1.1 禽大腸桿菌病研究進展
        1.1.1 禽致病性大腸桿菌病原學研究
        1.1.2 流行病學研究
        1.1.3 診斷
        1.1.4 疾病的防治
    1.2 禽大腸桿菌病疫苗研究進展
        1.2.1 滅活苗
        1.2.2 亞單位疫苗
        1.2.3 弱毒菌苗
第二章 研究目的和意義
第三章 臨床分離鑒定禽大腸桿菌
    3.1 材料
        3.1.1 病料來源
        3.1.2 菌株
        3.1.3 培養(yǎng)基
        3.1.4 酶與試劑
        3.1.5 引物序列表
    3.2 方法
        3.2.1 細菌的分離
        3.2.2 大腸桿菌看家基因的擴增
        3.2.3 生理生化反應
        3.2.4 血清型鑒定
        3.2.5 分離菌株的群系鑒定
        3.2.6 毒力基因檢測
        3.2.7 藥敏實驗
        3.2.8 分離菌株小鼠感染試驗
    3.3 結果與分析
        3.3.1 病原菌分離培養(yǎng)
        3.3.2 看家基因擴增
        3.3.3 生化實驗結果
        3.3.4 血清分型
        3.3.5 分離菌株群系鑒定
        3.3.6 毒力基因擴增
        3.3.7 藥敏試驗
        3.3.8 小鼠感染試驗
第四章 基因缺失菌株的構建
    4.1 材料
        4.1.1 細菌菌株及質粒
        4.1.2 主要藥品及試劑
        4.1.3 主要培養(yǎng)基的配制
        4.1.4 PCR引物的設計與合成
    4.2. 方法
        4.2.1 細菌的增殖及大腸桿菌基因組的提取
        4.2.2 禽大腸桿菌ACN003菌株iucB基因上下游同源臂的擴增與鑒定
        4.2.3 PCR產物的回收與純化
        4.2.4 重組自殺性質粒pRE112△iucB的構建
        4.2.5 接合轉移
        4.2.6 基因缺失株的篩選
        4.2.7 基因缺失突變菌株的小鼠感染試驗
    4.3 結果
        4.3.1 iucB基因上下游同源臂的PCR擴增鑒定及重組質粒的鑒定
        4.3.2 單交換菌株的PCR鑒定
        4.3.3 iucB基因缺失突變株的篩選與鑒定
        4.3.4 小鼠感染試驗
        4.3.5 感染后組織分菌鑒定結果
第五章 討論
    5.1 雞大腸桿菌的臨床分離鑒定
        5.1.1 關于遲發(fā)酵乳糖型大腸桿菌的研究
        5.1.2 分離菌株的血清分型
        5.1.3 毒力基因的檢測以及部分菌株的毒力試驗
        5.1.4 分離菌株的耐藥性分析
        5.1.5 分離菌株群系分析
    5.2 禽大腸桿菌基因缺失菌株的研究
第六章 結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]禽致病性大腸桿菌研究進展[J]. 馬興樹,范翠蝶,夏玉龍.  中國畜牧獸醫(yī). 2013(02)
[2]國外禽用抗菌藥的耐藥性監(jiān)測與控制[J]. 郝海紅,王玉蓮,黃玲利,戴夢紅,程古月,劉振利,袁宗輝.  中國獸藥雜志. 2013(01)
[3]2011年我國部分地區(qū)雞源大腸桿菌耐藥性分析[J]. 鄭蓓,常維山.  山東畜牧獸醫(yī). 2012(05)
[4]蛋雞大腸桿菌多價滅活苗的制備與初步應用[J]. 張君慧,王晶鈺,沈文正,高睿,薛增迪,張曼.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2011(17)
[5]iss基因與雞大腸桿菌致病力的關系[J]. 樊琛,王宇,王亞君,劉桂芹,李一經.  中國獸醫(yī)科學. 2010(01)
[6]一株不發(fā)酵乳糖致病性大腸桿菌的分離與鑒定[J]. 古飛霞,陳錦均,劉容珍,胡婉儀,溫建成.  經濟動物學報. 2009(04)
[7]雞大腸桿菌多價復合佐劑滅活苗的研制[J]. 薛俊龍,張李俊,王采先,詹麗娥,田林君,李紅麗,張國權.  山西農業(yè)科學. 2009(11)
[8]禽霍亂、大腸桿菌病和克雷伯菌病多價蜂膠三聯(lián)滅活疫苗的研制[J]. 金天明,谷禹,馬文芝,周淑云,李富桂,郭亮,張建斌.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2009(15)
[9]不發(fā)酵或遲發(fā)酵乳糖型禽大腸埃希菌的分離鑒定[J]. 成大榮,朱善元,錢金梅,董丙敏.  動物醫(yī)學進展. 2009(05)
[10]遼寧省禽大腸桿菌血清型分布與大腸桿菌病防治措施研究[J]. 李玉文,李惠蘭,張鵬,李鳳元,李作義,楊本勇,李勝杰,閆明媚,吳洪濤,張雷.  中國家禽. 2008(04)

碩士論文
[1]雞源致病性大腸埃希菌耐藥基因及毒力基因檢測研究[D]. 王利勤.西北農林科技大學 2012
[2]雞源禽致病性大腸桿菌分離鑒定及其毒力相關基因分布特征分析[D]. 蘇志新.南京農業(yè)大學 2011
[3]雞致病性大腸桿菌FimC基因缺失菌株的構建及其生物學特性的研究[D]. 劉雪威.東北農業(yè)大學 2008
[4]臨床分離雞源性大腸桿菌分型及其耐藥性檢測和質粒DNA分析[D]. 韓偉.河北農業(yè)大學 2006
[5]我國部分地區(qū)243株禽源性大腸桿菌分離株的病原生物學特性[D]. 趙娟.揚州大學 2005



本文編號：3003758