大腸桿菌是一類常見的人畜共患病病原菌。臨床上分為腸內(nèi)致病菌、腸外致病菌和共生菌三類。對(duì)于禽類而言,大腸桿菌可作為腸道內(nèi)正常菌群存在,或存在于宿主粘膜表面。只有那些具有特定毒力特征且引起發(fā)病的菌株被認(rèn)定為禽致病性大腸桿菌,它是家禽最常見的病原菌之一,大多引起腸道外感染,主要表現(xiàn)為呼吸道或全身性感染,引起一系列疾病最終引起死亡,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí)大腸桿菌病還受環(huán)境及機(jī)體因素誘發(fā)產(chǎn)生。目前該病已躋身為危害養(yǎng)禽業(yè)的細(xì)菌性疾病之首。為了解雞大腸桿菌的流行病學(xué)特點(diǎn),本研究對(duì)武漢周邊8個(gè)地區(qū)雞大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定,通過血清分型、耐藥表型、群系鑒定及毒力因子分析確定優(yōu)勢(shì)血清型的強(qiáng)毒菌株ACN003,并缺失其毒力基因iucB。本研究主要內(nèi)容如下：一.雞致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性等特性的研究1.自武漢周邊雞場(chǎng)送檢的發(fā)病雞中分離得到45株細(xì)菌。經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)、IMVIC試驗(yàn)等生化試驗(yàn)及培養(yǎng)特性觀察,證實(shí)獲得的45株細(xì)菌為大腸桿菌。生化試驗(yàn)表明：45株菌均能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蜜二糖、山梨醇、甘露醇,不分解肌醇、纖維二糖、阿拉伯醇,部分菌株可分解衛(wèi)矛醇、山梨糖、棉子糖、鼠李糖、蔗糖等。所有分得... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表 （abbreviation）
第一章 前言
    1.1 禽大腸桿菌病研究進(jìn)展
        1.1.1 禽致病性大腸桿菌病原學(xué)研究
        1.1.2 流行病學(xué)研究
        1.1.3 診斷
        1.1.4 疾病的防治
    1.2 禽大腸桿菌病疫苗研究進(jìn)展
        1.2.1 滅活苗
        1.2.2 亞單位疫苗
        1.2.3 弱毒菌苗
第二章 研究目的和意義
第三章 臨床分離鑒定禽大腸桿菌
    3.1 材料
        3.1.1 病料來源
        3.1.2 菌株
        3.1.3 培養(yǎng)基
        3.1.4 酶與試劑
        3.1.5 引物序列表
    3.2 方法
        3.2.1 細(xì)菌的分離
        3.2.2 大腸桿菌看家基因的擴(kuò)增
        3.2.3 生理生化反應(yīng)
        3.2.4 血清型鑒定
        3.2.5 分離菌株的群系鑒定
        3.2.6 毒力基因檢測(cè)
        3.2.7 藥敏實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 分離菌株小鼠感染試驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 病原菌分離培養(yǎng)
        3.3.2 看家基因擴(kuò)增
        3.3.3 生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.4 血清分型
        3.3.5 分離菌株群系鑒定
        3.3.6 毒力基因擴(kuò)增
        3.3.7 藥敏試驗(yàn)
        3.3.8 小鼠感染試驗(yàn)
第四章 基因缺失菌株的構(gòu)建
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)菌菌株及質(zhì)粒
        4.1.2 主要藥品及試劑
        4.1.3 主要培養(yǎng)基的配制
        4.1.4 PCR引物的設(shè)計(jì)與合成
    4.2. 方法
        4.2.1 細(xì)菌的增殖及大腸桿菌基因組的提取
        4.2.2 禽大腸桿菌ACN003菌株iucB基因上下游同源臂的擴(kuò)增與鑒定
        4.2.3 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        4.2.4 重組自殺性質(zhì)粒pRE112△iucB的構(gòu)建
        4.2.5 接合轉(zhuǎn)移
        4.2.6 基因缺失株的篩選
        4.2.7 基因缺失突變菌株的小鼠感染試驗(yàn)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 iucB基因上下游同源臂的PCR擴(kuò)增鑒定及重組質(zhì)粒的鑒定
        4.3.2 單交換菌株的PCR鑒定
        4.3.3 iucB基因缺失突變株的篩選與鑒定
        4.3.4 小鼠感染試驗(yàn)
        4.3.5 感染后組織分菌鑒定結(jié)果
第五章 討論
    5.1 雞大腸桿菌的臨床分離鑒定
        5.1.1 關(guān)于遲發(fā)酵乳糖型大腸桿菌的研究
        5.1.2 分離菌株的血清分型
        5.1.3 毒力基因的檢測(cè)以及部分菌株的毒力試驗(yàn)
        5.1.4 分離菌株的耐藥性分析
        5.1.5 分離菌株群系分析
    5.2 禽大腸桿菌基因缺失菌株的研究
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽致病性大腸桿菌研究進(jìn)展[J]. 馬興樹,范翠蝶,夏玉龍.  中國畜牧獸醫(yī). 2013(02)
[2]國外禽用抗菌藥的耐藥性監(jiān)測(cè)與控制[J]. 郝海紅,王玉蓮,黃玲利,戴夢(mèng)紅,程古月,劉振利,袁宗輝.  中國獸藥雜志. 2013(01)
[3]2011年我國部分地區(qū)雞源大腸桿菌耐藥性分析[J]. 鄭蓓,常維山.  山東畜牧獸醫(yī). 2012(05)
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碩士論文
[1]雞源致病性大腸埃希菌耐藥基因及毒力基因檢測(cè)研究[D]. 王利勤.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[2]雞源禽致病性大腸桿菌分離鑒定及其毒力相關(guān)基因分布特征分析[D]. 蘇志新.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]雞致病性大腸桿菌FimC基因缺失菌株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的研究[D]. 劉雪威.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[4]臨床分離雞源性大腸桿菌分型及其耐藥性檢測(cè)和質(zhì)粒DNA分析[D]. 韓偉.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[5]我國部分地區(qū)243株禽源性大腸桿菌分離株的病原生物學(xué)特性[D]. 趙娟.揚(yáng)州大學(xué) 2005



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