長(zhǎng)鏈非編碼RNA （long non-coding RNA, lncRNA）是一類(lèi)轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200nt,在200nt-100kb之間的一類(lèi)非編碼RNA分子,位于細(xì)胞核內(nèi)或胞漿內(nèi),在真核細(xì)胞內(nèi)被普遍轉(zhuǎn)錄,但不具有或很少具有蛋白編碼功能。目前對(duì)lncRNA的研究,特別是在禽類(lèi)中還比較少。本實(shí)驗(yàn)利用RACE技術(shù)以及RT-PCR技術(shù)對(duì)在雞上發(fā)現(xiàn)的一個(gè)未知功能的EST （Genebank Accn:CR406381.1）進(jìn)行了了5’RACE和3’RACE擴(kuò)增,并對(duì)得到的未知新基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,利用RT-PCR以及熒光定量技術(shù)研究該新基因組織表達(dá)情況。本實(shí)驗(yàn)主要從以下三個(gè)部分進(jìn)行試驗(yàn)研究。試驗(yàn)一為了得到該未知基因的全長(zhǎng)cDNA序列,試驗(yàn)采用SMART RACE KIT （Clontech Laboratories Inc., USA）試劑盒對(duì)該基因進(jìn)行全長(zhǎng)克隆。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：5’RACE擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為1197bp,3’RACE擴(kuò)增出現(xiàn)了4種不同的剪接體形式,分別為403bp、535bp、658bp、1310bp。將5’RACE及3’RACE序列結(jié)果進(jìn)行校正后拼接,總共得到該新基因的4... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SMART?5’-RACE的原理

圖2.1.2. 3. 2美光定量PCR技術(shù)1996年美國(guó)應(yīng)HJ生物系統(tǒng)公司(AEBI)推山炎光定量PCR儀，實(shí)現(xiàn)了 PCR試的IS躍。由丁?其爲(wèi)有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定M準(zhǔn)確、速度快、全優(yōu)點(diǎn)迅速成為分子生物學(xué)研究中的重耍工A.。從宵臺(tái)焚光定量PCR儀的出現(xiàn)到年了，其應(yīng)用范圍也逐漸擴(kuò)大，0前己廣泛應(yīng)用丁?動(dòng)植物，細(xì)齒以及病毋基閃的成為分+生物學(xué)實(shí)驗(yàn)必備的儀器之一[49]。炎光定m PCR原理所謂焚光定量PCR技術(shù)，足指在PCR反應(yīng)體系中加入突光集團(tuán)，利用炎光時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR過(guò)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法[59’51]。在突光定量PCR技術(shù)中有一個(gè)很重要的概念：Ct值。C代表Cycle，t代表thresh

3. 3. 1總RNA提取從絲毛烏骨雞中提取卵巢組織，圖3-1為提取的總RNA的結(jié)果，28S、ISS、5S條帶淸晰，表明所提取的總RNA完整性較好，可)ti 丁?后續(xù)實(shí)驗(yàn)。28S —18S ?——?圖3-1總RNA電泳檢測(cè)Fig.3-1 Electrophoresis result of total RNA3.3.2 RACE 擴(kuò)増3. 3. 2. 1 RACE擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)將提取的總RNA按照RACE試劑盒耍求，分別進(jìn)行5’RACE (圖3-2A)和3’RACE擴(kuò)增（圖3-2B)。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1.2%的瓊脂糖屯泳檢測(cè)，。18

【參考文獻(xiàn)】：
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