長鏈非編碼RNA （long non-coding RNA, lncRNA）是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200nt,在200nt-100kb之間的一類非編碼RNA分子,位于細胞核內(nèi)或胞漿內(nèi),在真核細胞內(nèi)被普遍轉(zhuǎn)錄,但不具有或很少具有蛋白編碼功能。目前對lncRNA的研究,特別是在禽類中還比較少。本實驗利用RACE技術(shù)以及RT-PCR技術(shù)對在雞上發(fā)現(xiàn)的一個未知功能的EST （Genebank Accn:CR406381.1）進行了了5’RACE和3’RACE擴增,并對得到的未知新基因序列進行生物信息學(xué)分析,利用RT-PCR以及熒光定量技術(shù)研究該新基因組織表達情況。本實驗主要從以下三個部分進行試驗研究。試驗一為了得到該未知基因的全長cDNA序列,試驗采用SMART RACE KIT （Clontech Laboratories Inc., USA）試劑盒對該基因進行全長克隆。實驗結(jié)果如下：5’RACE擴增產(chǎn)物長度為1197bp,3’RACE擴增出現(xiàn)了4種不同的剪接體形式,分別為403bp、535bp、658bp、1310bp。將5’RACE及3’RACE序列結(jié)果進行校正后拼接,總共得到該新基因的4... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

SMART?5’-RACE的原理

圖2.1.2. 3. 2美光定量PCR技術(shù)1996年美國應(yīng)HJ生物系統(tǒng)公司(AEBI)推山炎光定量PCR儀，實現(xiàn)了 PCR試的IS躍。由丁?其爲(wèi)有特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好、定M準確、速度快、全優(yōu)點迅速成為分子生物學(xué)研究中的重耍工A.。從宵臺焚光定量PCR儀的出現(xiàn)到年了，其應(yīng)用范圍也逐漸擴大，0前己廣泛應(yīng)用丁?動植物，細齒以及病毋基閃的成為分+生物學(xué)實驗必備的儀器之一[49]。炎光定m PCR原理所謂焚光定量PCR技術(shù)，足指在PCR反應(yīng)體系中加入突光集團，利用炎光時監(jiān)測整個PCR過程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法[59’51]。在突光定量PCR技術(shù)中有一個很重要的概念：Ct值。C代表Cycle，t代表thresh

3. 3. 1總RNA提取從絲毛烏骨雞中提取卵巢組織，圖3-1為提取的總RNA的結(jié)果，28S、ISS、5S條帶淸晰，表明所提取的總RNA完整性較好，可)ti 丁?后續(xù)實驗。28S —18S ?——?圖3-1總RNA電泳檢測Fig.3-1 Electrophoresis result of total RNA3.3.2 RACE 擴増3. 3. 2. 1 RACE擴增產(chǎn)物檢測將提取的總RNA按照RACE試劑盒耍求，分別進行5’RACE (圖3-2A)和3’RACE擴增（圖3-2B)。擴增產(chǎn)物進行1.2%的瓊脂糖屯泳檢測，。18

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長鏈非編碼RNA的作用機制及其研究方法[J]. 夏天,肖丙秀,郭俊明.  遺傳. 2013(03)
[2]長鏈非編碼RNA及其在醫(yī)學(xué)、家畜方面的研究進展[J]. 李托,徐華榮,王昕.  中國畜牧獸醫(yī). 2012(12)
[3]長鏈非編碼RNA及其與腫瘤相關(guān)研究進展[J]. 張子臻,趙文毅,曹暉.  中華普通外科雜志. 2012 (11)
[4]非編碼長鏈RNA與基因表達調(diào)控[J]. 史華俊,劉忠,郭俊明.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2012(09)
[5]長鏈非編碼RNA與前列腺癌[J]. 郭輝,傅強.  上海醫(yī)學(xué). 2012(05)
[6]長鏈非編碼RNA與腫瘤研究進展[J]. 朱雯,王朝霞.  中國腫瘤臨床. 2012(08)
[7]長鏈非編碼RNA的功能與疾病[J]. 武志娟,鐘金城.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2012(03)
[8]長鏈非編碼RNA的研究進展[J]. 劉娜娜,李少林,羅治彬.  廣東醫(yī)學(xué). 2011(22)
[9]熒光定量PCR技術(shù)原理及在分子診斷中的應(yīng)用進展[J]. 張金波,羅佳濱,張春斌,朱金玲,呂冬霞.  中國優(yōu)生與遺傳雜志. 2006(12)
[10]實時熒光定量PCR的應(yīng)用和進展[J]. 付春華,陳孝平,余龍江.  激光生物學(xué)報. 2005(06)



本文編號：3003718