雞胚常被用作發(fā)育生物學(xué)研究的動(dòng)物模型,應(yīng)用于深層次揭示動(dòng)物發(fā)育的機(jī)理,尤其是生殖系統(tǒng)的發(fā)育,在實(shí)踐中提高家禽的繁殖性能,在理論上闡明生殖細(xì)胞早期發(fā)育的調(diào)控機(jī)理。本實(shí)驗(yàn)以海蘭雞胚為材料,研究四個(gè)科學(xué)問題：①雌激素通過改變性腺的結(jié)構(gòu)而影響生殖細(xì)胞性別發(fā)育的方向；②垂體-卵巢軸激素如何調(diào)控生殖細(xì)胞在有絲分裂和減數(shù)分裂起始之間的選擇；③孕酮（P4）通過何種機(jī)制誘發(fā)生殖細(xì)胞減數(shù)分裂的起始；④堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）是否參與調(diào)節(jié)卵巢內(nèi)生殖細(xì)胞的發(fā)育。1.雌激素對生殖細(xì)胞發(fā)育方向的影響哺乳動(dòng)物和鳥類生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始存在性別間差異,雌性生殖細(xì)胞于胚胎期起始減數(shù)分裂而雄性生殖細(xì)胞在胚胎期增殖后進(jìn)入滯育階段。早期生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始被認(rèn)為可由性腺的結(jié)構(gòu)所決定,但缺少體內(nèi)的證據(jù)來證明。本研究使用雌激素（E2）和芳香化酶抑制劑（AI）處理進(jìn)行性別逆轉(zhuǎn),改變性腺結(jié)構(gòu)檢測生殖細(xì)胞性別決定因素。結(jié)果表明：E2或AI處理均可引起性腺形態(tài)逆轉(zhuǎn)；處理后兩性卵巢樣皮質(zhì)內(nèi)生殖細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂狀態(tài),而精索狀結(jié)構(gòu)中均未見此現(xiàn)象發(fā)生。推測出現(xiàn)上述現(xiàn)象原因是E2和AI處理后使得性腺內(nèi)中視黃酸（RA）濃度發(fā)生了改變。編碼... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 減數(shù)分裂概況
        1.1.1 減數(shù)分裂過程
        1.1.2 卵子發(fā)生過程
        1.1.3 精子的發(fā)生過程
    1.2 生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始的調(diào)控
        1.2.1 生殖細(xì)胞起始減數(shù)分裂的條件
        1.2.2 RA起始減數(shù)分裂
        1.2.3 調(diào)控減數(shù)分裂的其他因素
        1.2.4 展望
    1.3 雞胚模型在生殖生理研究中的優(yōu)勢
        1.3.1 易獲取
        1.3.2 體外發(fā)育,易于操作
        1.3.3 內(nèi)分泌研究時(shí)母體影響較小
        1.3.4 轉(zhuǎn)基因模型建立的優(yōu)勢
        1.3.5 展望
    1.4 本研究的目的和內(nèi)容
        1.4.1 研究的目的和意義
        1.4.2 研究的目標(biāo)和內(nèi)容
第二章 雌激素對雞胚性腺生殖細(xì)胞發(fā)育的影響
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 主要器材
        2.2.3 主要試劑及配制
        2.2.4 胚胎處理及樣品采集
        2.2.5 性別鑒定
        2.2.6 石蠟切片制作和形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.7 免疫組織化學(xué)染色
        2.2.8 冰凍切片免疫熒光染色
        2.2.9 RNA提取
        2.2.10 cDNA的合成
        2.2.11 Real-time PCR
        2.2.12 BrdU摻入鑒定生殖細(xì)胞的增殖
        2.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 生殖細(xì)胞中的Dazl定位
        2.3.2 雌激素處理后性腺的形態(tài)特征
        2.3.3 卵巢皮質(zhì)和卵巢樣皮質(zhì)內(nèi)生殖細(xì)胞起始減數(shù)分裂
        2.3.4 睪丸及睪丸精索狀結(jié)構(gòu)內(nèi)生殖細(xì)胞保持有絲分裂狀態(tài)
        2.3.5 性腺內(nèi)RA合成、代謝相關(guān)酶mRNA的表達(dá)變化
    2.4 討論
第三章 垂體-卵巢軸激素對卵巢生殖細(xì)胞發(fā)育的影響
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.2 主要器材
        3.2.3 主要試劑及配制
        3.2.4 處理方法及組織收集
        3.2.5 器官培養(yǎng)
        3.2.6 RNA提取、cDNA合成及Real time PCR
        3.2.7 Mi croRNA表達(dá)分析
        3.2.8 免疫熒光共定位
        3.2.9 BrdU摻入及檢測
        3.2.10 Western blot分析
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 FSH和LH調(diào)節(jié)生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始
        3.3.2 FSH促進(jìn)生殖細(xì)胞有絲分裂并延遲其減數(shù)分裂起始
        3.3.3 促性腺激素調(diào)控miR181a及NR6A1 mRNA的轉(zhuǎn)錄
        3.3.4 雌激素參與了FSH調(diào)節(jié)生殖細(xì)胞減數(shù)分裂及有絲分裂
4分泌調(diào)節(jié)減數(shù)分裂起始">        3.3.5 LH通過P₄分泌調(diào)節(jié)減數(shù)分裂起始
        3.3.6 FSH在生殖細(xì)胞發(fā)育中啟主導(dǎo)作用
    3.4 討論
第四章 孕酮在生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始中的作用
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.2 主要器材
        4.2.3 主要試劑及配制
        4.2.4 處理方法及組織收集
        4.2.5 器官培養(yǎng)
        4.2.6 RNA提取,cDNA合成及Real time PCR
        4.2.7 免疫熒光共定位
        4.2.8 高效液相色譜分析
        4.2.9 生殖細(xì)胞-體細(xì)胞共培養(yǎng)模型建立
        4.2.10 RNA干擾
        4.2.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果
4促進(jìn)雌性生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始">        4.3.1 P₄促進(jìn)雌性生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始
4促進(jìn)體外雄性生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始">        4.3.2 P₄促進(jìn)體外雄性生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始
4誘發(fā)減數(shù)分裂不依賴于PR">        4.3.3 P₄誘發(fā)減數(shù)分裂不依賴于PR
4促進(jìn)生殖細(xì)胞減數(shù)分裂不依賴于RA">        4.3.4 P₄促進(jìn)生殖細(xì)胞減數(shù)分裂不依賴于RA
    4.4 討論
第五章 堿性成纖維細(xì)胞生長因子對雞胚卵巢生殖細(xì)胞發(fā)育的影響
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.2 主要器材
        5.2.3 主要試劑及配制方法
        5.2.4 器官培養(yǎng)
        5.2.5 雞胚內(nèi)注射bFGF
        5.2.6 RNA提取、cDNA合成及Real-Time RT-PCR
        5.2.7 FGFR1原位雜交
        5.2.8 Giemsa染色檢測生殖細(xì)胞減數(shù)分裂狀態(tài)
        5.2.9 免疫熒光染色
        5.2.10 BrdU摻入檢測生殖細(xì)胞的增殖
        5.2.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 bFGF及FGFR mRNA在卵巢發(fā)育過程中的表達(dá)情況
        5.3.2 RA促進(jìn)生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始
        5.3.3 bFGF對RA引發(fā)的減數(shù)分裂起始的抑制作用
        5.3.4 bFGF促進(jìn)生殖細(xì)胞增殖
    5.4 討論
第六章 成雞卵巢生殖細(xì)胞再生的探索
    6.1 引言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        6.2.2 主要器材
        6.2.3 主要試劑及配制方法
        6.2.4 RNA提取、cDNA合成及Real-Time RT-PCR
        6.2.5 免疫熒光染色
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 成雞卵巢中原始生殖細(xì)胞的檢測
        6.3.2 成年雞卵巢表達(dá)生殖細(xì)胞減數(shù)分裂起始相關(guān)基因
    6.4 討論
第七章 提示和創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
博士期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Follicle-stimulating hormone promotes proliferation of cultured chicken ovarian germ cells through protein kinases A and C activation[J]. Hong-yun LIU1,Wei-dong ZENG1,Ai-ling CAO1,2,Cai-qiao ZHANG1 (1Key Laboratory of Animal Epidemic Etiology and Immunological Prevention of the Ministry of Agriculture,College of Animal Sciences,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China) (2Xiaoshan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hangzhou 311208,China).  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2010(12)

博士論文
[1]局部性促生長因子對雞卵泡發(fā)育的調(diào)控及其機(jī)理的研究[D]. 林金杏.浙江大學(xué) 2011



本文編號：3003621