發(fā)布時(shí)間：2021-01-27 17:24

　　肉雞是選育程度最高的家禽之一。高強(qiáng)度的選育改善了生產(chǎn)性能,集約化的飼養(yǎng)管理方式降低了生產(chǎn)費(fèi)用,使肉雞的經(jīng)濟(jì)價(jià)值得到顯著提升的同時(shí)也導(dǎo)致肉雞腿病為代表的營(yíng)養(yǎng)代謝病發(fā)病率居高不下。肉雞腿病是一類(lèi)疾病的統(tǒng)稱(chēng),包括肉雞股骨頭壞死,肉雞脛骨發(fā)育不良等等。肉雞股骨頭壞死的臨床特征表現(xiàn)為跛行,因不能正常飲水和采食,病雞常發(fā)生衰竭和死亡。該病不僅嚴(yán)重影響動(dòng)物福利,導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失也相當(dāng)可觀。該病病因十分復(fù)雜,至今為完全闡明。根據(jù)大量流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)分析、試驗(yàn)研究和臨床觀察,認(rèn)為肉雞股骨頭壞死的發(fā)生與機(jī)體內(nèi)外的諸多因素有關(guān),其中最重要的是內(nèi)部因素。內(nèi)部因素中軟骨內(nèi)成骨異常是導(dǎo)致肉雞股骨頭壞死的最重要的因素之一。軟骨內(nèi)成骨受多種激素和細(xì)胞因子的調(diào)控。這些調(diào)控因子共同作用于生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞,調(diào)控軟骨細(xì)胞的增殖、分化和成熟,影響股骨、脛骨等長(zhǎng)骨的縱向生長(zhǎng)。在諸多調(diào)控因子中,Ihh/PTHrP信號(hào)軸的作用十分關(guān)鍵,該信號(hào)通路的紊亂可致肉雞股骨頭壞死,然而該信號(hào)軸在肉雞股骨頭壞死病理發(fā)生中的作用機(jī)理,尚未見(jiàn)系統(tǒng)報(bào)道。本研究目的旨在建立肉雞股骨頭壞死動(dòng)物模型,比較未發(fā)病肉雞與股骨頭壞死模型,生產(chǎn)性能變化,股骨近端生長(zhǎng)板Ih... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
前言
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 肉雞股骨頭壞死研究進(jìn)展
        1 肉雞股骨頭壞死
        2 股骨頭壞死病因和發(fā)病機(jī)制
            2.1 創(chuàng)傷性股骨頭壞死
            2.2 非創(chuàng)傷性股骨頭壞死
                2.2.1 脂肪代謝紊亂和脂肪栓子
                2.2.2 皮質(zhì)類(lèi)固醇類(lèi)激素（Glucocorticosteroids,GCs）
                2.2.3 自愈作用
                2.2.4 血管發(fā)生抑制
                2.2.5 機(jī)械壓力
                2.2.6 細(xì)胞凋亡
                2.2.7 血管內(nèi)凝血
        3 臨床癥狀
        4 病理變化
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第二章 軟骨內(nèi)成骨的調(diào)控
        1 間充質(zhì)凝聚物（mesenchymal condensations,MCS）
        2 軟骨細(xì)胞分化
            2.1 Sox蛋白
            2.2 胞外信號(hào)調(diào)節(jié)
        3 生長(zhǎng)板生長(zhǎng)發(fā)育
            3.1 生長(zhǎng)板生長(zhǎng)胞外調(diào)節(jié)因子
                3.1.1 甲狀旁腺相關(guān)肽(（parathyroid hormone-related peptide,PTHrP）
                3.1.2 IHH
                3.1.3 PTHrP-Ihh信號(hào)軸負(fù)反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)
                3.1.4 FGF
                3.1.5 BMP
                3.1.6 WNT
                3.1.7 NOTCH
            3.2 核因子對(duì)生長(zhǎng)板的調(diào)節(jié)
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
下篇 試驗(yàn)研究
    第三章 IHH/PTHRP信號(hào)軸在肉雞股骨頭壞死病理發(fā)生中的調(diào)控作用
        1 材料與方法
            1.1 主要儀器
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.4 樣品采集
            1.5 生化指標(biāo)檢測(cè)
            1.6 骨指標(biāo)測(cè)定
                1.6.1 骨指數(shù)測(cè)定
                1.6.2 骨放射密度測(cè)定
                1.6.3 骨強(qiáng)度測(cè)定
            1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量
                1.7.1 組織中Toatal RNA提取純化
                1.7.2 樣cDNA制備
                1.7.3 引物設(shè)計(jì)與合成
                1.7.4 Realtime PCR與結(jié)果分析
            1.8 石蠟切片制作及HE染色
                1.8.1 載玻片防脫片預(yù)處理
                1.8.2 組織脫鈣處理
                1.8.3 脫水
                1.8.4 透明
                1.8.5 浸蠟與包埋
                1.8.6 切片
                1.8.7 HE染色
            1.9 免疫組織化學(xué)檢測(cè)
        2 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)
        3 結(jié)果與分析
            3.1 FHN評(píng)分統(tǒng)計(jì)結(jié)果
            3.2 體重、肝指數(shù)、采食量變化
            3.3 生化標(biāo)志物變化
            3.4 骨生長(zhǎng)參數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果
            3.5 VEGF、PTHrP、Ihh、GLI2、Bcl2、BMP6、MMP9等基因的表達(dá)變化
            3.6 組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果
                3.6.1 HE染色結(jié)果
                3.6.2 Ⅹ型膠原、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果
        4 討論
            4.1 甲潑尼龍建立肉雞股骨頭壞死模型
            4.2 誘導(dǎo)股骨頭壞死模型骨指數(shù)和骨骼代謝標(biāo)志物變化
            4.3 Ihh-PTHrP信號(hào)在FHN發(fā)生中的作用
        參考文獻(xiàn)
    第四章 Ihh/PTHrP信號(hào)軸對(duì)肉雞軟骨細(xì)胞增殖、分化、
        1 材料和方法
            1.1 試驗(yàn)材料
                1.1.1 主要儀器和設(shè)備
                1.1.2 試驗(yàn)試劑
                1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
            1.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性
            1.4 ALP活性檢測(cè)
                1.4.1 二乙醇胺（DEA）緩沖液配制
                1.4.2 對(duì)硝基酚（PNP）標(biāo)準(zhǔn)液與裂解液TritonX-100配制配制
                1.4.3 ALP濃度測(cè)定
            1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)軟骨細(xì)胞相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量
                1.5.1 Total RNA的提取與純化
                1.5.2 引物設(shè)計(jì)與合成
                1.5.3 熒光定量PCR
            1.6 蛋白免疫印跡檢查蛋白相對(duì)表達(dá)量
                1.6.1 樣品制備
                1.6.2 BCA法蛋白濃度測(cè)定：參照1.4.4
                1.6.3 樣品處理
                1.6.4 SDS-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳
                1.6.5 轉(zhuǎn)印
                1.6.6 免疫反應(yīng)
                1.6.7 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)
                1.6.8 凝膠分析
        2 數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計(jì)
        3 結(jié)果與分析
            3.1 軟骨細(xì)胞增殖活性（MTT）
            3.2 ALP活性檢測(cè)結(jié)果
            3.3 PTHrP、Ihh和Ⅹ型膠原等基因的表達(dá)量變化
            3.4 Ihh、Ⅱ型膠原和Ⅹ型膠原蛋白表達(dá)量變化
        4 討論
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
攻讀碩士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]兔激素性股骨頭壞死模型的建立[J]. 王泳,高春錦,楊晉才,武連華,李海東.  中國(guó)病理生理雜志. 2009(11)
[2]短期應(yīng)用大劑量激素導(dǎo)致雞股骨頭壞死[J]. 程田,李月白,王義生.  鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(02)
[3]間斷應(yīng)用激素法制備兔股骨頭缺血性壞死模型[J]. 趙哲,王文波,李吉友,劉洋.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào). 2008(04)
[4]激素性股骨頭缺血性壞死發(fā)病機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 王新生,許振華,陳風(fēng)苞,張?jiān)茲h,劉保民,崔全軍,康文成.  中華骨科雜志. 1995(03)



本文編號(hào)：3003439