CNTN1基因是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的與癌癥發(fā)生發(fā)展有關(guān)的基因,早期的研究表明CNTN1基因和神經(jīng)突觸發(fā)生和發(fā)育有關(guān),直到2006年Su等首次通過(guò)c DNA全基因序列分析發(fā)現(xiàn),該基因與肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān),至此關(guān)于CNTN1基因在腫瘤方面的作用才被研究者重視。目前為止,CNTN1基因在腫瘤方面的作用機(jī)制仍不清楚。因此,本實(shí)驗(yàn)使用犬乳腺腫瘤細(xì)胞CHMm作為實(shí)驗(yàn)材料研究CNTN1基因在犬乳腺腫瘤中轉(zhuǎn)移與侵襲的作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)委托吉瑪公司設(shè)計(jì)CNTN1基因sh RNA質(zhì)粒,使用脂質(zhì)體2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法將CNTN1 sh RNA質(zhì)粒導(dǎo)入犬乳腺腫瘤細(xì)胞系CHMm細(xì)胞。采用CCK-8和細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,Annexin V-ACP/7-AAD凋亡試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡能力,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力,Western blot檢測(cè)Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白水平變化,探討CNTN1基因沉默后對(duì)犬乳腺腫瘤CHMm細(xì)胞及Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白影響。結(jié)果:1、熒光顯微鏡下可見(jiàn)中轉(zhuǎn)染CNTN1 sh RNA質(zhì)粒的CHMm細(xì)胞存在大量綠色熒光,Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染CNTN1 sh RNA... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 CNTN1基因
        1.1.1 CNTN1基因的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 CNTN1基因在非腫瘤疾病中的作用
        1.1.3 CNTN1基因與腫瘤的關(guān)系
        1.1.4 CNTN1基因在腫瘤中的作用機(jī)制
    1.2 PI3K/Akt信號(hào)通路與腫瘤
    1.3 RNAi
        1.3.1 RNAi的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 RNAi作用機(jī)制
    1.4 本實(shí)驗(yàn)研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒和細(xì)胞系
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 犬乳腺腫瘤細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代及凍存
        2.2.2 犬乳腺腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.3 sh RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及菌液保種
        2.2.4 sh RNA質(zhì)粒的提取
        2.2.5 細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.6 BCA法測(cè)定蛋白濃度
        2.2.7 Western blot檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后各蛋白含量的變化
        2.2.8 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        2.2.9 細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞增殖能力
        2.2.10 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力
        2.2.11 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平
        2.2.12 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 犬乳腺腫瘤細(xì)胞CNTN1基因沉默效果
    3.2 轉(zhuǎn)染的CHMm細(xì)胞CNTN1基因的表達(dá)
    3.3 CNTN1基因沉默對(duì)CHMm細(xì)胞增殖的影響
    3.4 CNTN1基因沉默對(duì)CHMm細(xì)胞凋亡的影響
    3.5 CNTN1沉默對(duì)CHMm細(xì)胞遷移能力的影響
    3.6 CNTN1基因沉默對(duì)CHMm細(xì)胞Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白影響
        3.6.1 CNTN1基因?qū)HMm細(xì)胞中Akt信號(hào)通路的影響
        3.6.2 CNTN1基因沉默對(duì)CHMm細(xì)胞Akt通路凋亡蛋白影響
        3.6.3 CNTN1沉默對(duì)CHMm細(xì)胞Akt通路周期蛋白表達(dá)的影響
        3.6.4 CNTN1基因沉默對(duì)CHMm細(xì)胞Akt通路轉(zhuǎn)移蛋白表達(dá)的影響
4 討論
    4.1 RNAi技術(shù)的優(yōu)勢(shì)
    4.2 CNTN1基因作為腫瘤治療的新靶點(diǎn)
    4.3 CNTN1基因沉默下調(diào)AKT信號(hào)通路
    4.4 CNTN1基因沉默通過(guò)Akt通路調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡
    4.5 CNTN1基因沉默通過(guò)Akt通路調(diào)節(jié)細(xì)胞周期
    4.6 CNTN1基因沉默通過(guò)Akt通路調(diào)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)移
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3002211