為制備攜腸球菌膠原蛋白黏附素Ace抗原表位的鐵蛋白納米顆粒,并評(píng)價(jià)其免疫效果,利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)Ace抗原表位,合成相應(yīng)的基因片段,分別構(gòu)建含有相應(yīng)抗原表位基因與鐵蛋白H亞基基因的融合表達(dá)載體,同時(shí)構(gòu)建融合表達(dá)Ace蛋白和H亞基的質(zhì)粒pET-32a-ace-H,分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進(jìn)行融合表達(dá)。利用Western blot鑒定各重組融合蛋白的反應(yīng)原性,并利用透射電鏡觀察目的蛋白表征。用重組鐵蛋白納米顆粒分別制備免疫原進(jìn)行家兔接種試驗(yàn),并定期檢測(cè)家兔血清特異性抗體水平。結(jié)果顯示,正確構(gòu)建了6個(gè)Ace蛋白抗原表位基因與H亞基基因的融合表達(dá)載體pET-32a-ace1-H～pET-32a-ace6-H,其中pET-32a-ace1-H、pET-32a-ace3-H、pET-32a-ace5-H和pET-32a-ace6-H為可溶性表達(dá)載體。Western blot檢測(cè)顯示可溶性表達(dá)的4種融合蛋白均具有較好的反應(yīng)原性。透射電鏡圖像顯示,4種融合蛋白均形成了具有中空結(jié)構(gòu)的鐵蛋白納米籠,其直徑與天然鐵蛋白類似;而融合蛋白Ace-H納米籠沒(méi)有中空結(jié)構(gòu),且直徑比天然鐵蛋白大。家兔免疫試驗(yàn)結(jié)果顯示,6... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試驗(yàn)材料
    1.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    1.3 融合蛋白的表達(dá)與鑒定
    1.4 重組鐵蛋白納米顆粒免疫家兔試驗(yàn)
    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    2.2 重組蛋白表達(dá)與Western blot分析結(jié)果
    2.3 重組鐵蛋白納米顆粒免疫家兔后抗體水平檢測(cè)結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]糞腸球菌Ace抗原表位預(yù)測(cè)及重組表位疫苗載體構(gòu)建與表達(dá)[J]. 郭珍珍,和春昊,李濱洲,楚紅燕,張晨昕,楊國(guó)宇,陳麗穎.  河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(03)
[2]3種常見(jiàn)致病菌重組表位疫苗設(shè)計(jì)及重組腺病毒載體的構(gòu)建[J]. 林靜,尚翠玲,李小慧,高珂珂,孟佳麗,李昕,金天明.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(11)
[3]豬源鐵蛋白重鏈亞基納米粒的制備[J]. 李濱洲,和春昊,吳秋玲,郭珍珍,張留君,楊國(guó)宇,王亞賓,陳麗穎.  河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(03)
[4]不同粗蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)高繁殖力豬新品系-HN生長(zhǎng)性能及經(jīng)濟(jì)效益的影響[J]. 李生貴,王鵬飛,閆尊強(qiáng),陳國(guó)順,黃曉宇,楊巧麗,石海仁,滾雙寶,魏萬(wàn)鵬.  甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(02)
[5]豬源糞腸球菌Ace蛋白間接ELISA方法的建立與應(yīng)用[J]. 陳麗穎,張祥,李曉博,李英英,邵劉云,胡慧,王亞賓.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(05)



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