本論文對鴨瘟病毒（DPV）gJ基因進行了生物信息學分析,原核表達了gJ基因去跨膜區(qū)和信號肽的截段基因gJ（M）,并制備了截段基因表達蛋白的多克隆抗體,主要內容可歸納如下：1.鴨瘟病毒gJ基因的分子特性分析鴨瘟病毒gJ基因大小為1620bp,編碼539個氨基酸,理論等電點為6.037。鴨瘟病毒gJ蛋白在其N端有信號肽,C端有一個跨膜區(qū),閡值為0.5時共有32個潛在的磷酸化位點,這些位點包括15個絲氨酸位點,9個蘇氨酸位點,8個酪氨酸預測位點。通過對gJ蛋白做二級結構預測,結果表明無規(guī)則卷曲的氨基酸含量高（占50.65%）,為蛋白抗原表位提供了良好的空間。其ORF含62個稀有密碼子,含量占33.3%,包括9個連續(xù)的稀有密碼子串。2.鴨瘟病毒gJ截段基因的原核表達及多克隆抗體的制備成功構建了gJ全基因和gJ截段基因的重組原核表達質粒pET-32a（+）-gJ口pET-32（+）-gJ（M）,并將其轉化入大腸桿菌BL21（DE3）菌中。IPTG誘導結果表明gJ全基因不能有效表達,gJ截段基因高效表達,得到與預期蛋白大小一致的約為30kDa的不可溶性蛋白,免疫印跡結果表明表達蛋白可與兔抗DPV血... 

【文章來源】：四川農業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數】：44 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
一、文獻綜述及選題目的意義
    1 皰疹病毒GJ基因及其編碼蛋白的研究進展
        1.1 皰疹病毒GJ基因及其編碼蛋白的特點
            1.1.1 gJ基因的序列特點
            1.1.2 gJ基因的基因類型
            1.1.3 gJ蛋白的特點
        1.2 GJ的表達和定位
        1.3 GJ基因及其編碼蛋白的功能
            1.3.1 gJ與細胞凋亡
            1.3.2 gJ與病毒復制和轉錄
            1.3.3 gJ與抗原性
            1.3.4 gJ與病毒感染
        1.4 展望
    2 選題目的及意義
二、實驗研究
    1 材料
        1.1 DPV GJ基因生物信息學分析
        1.2 DPV GJ基因原核表達及抗體制備
            1.2.1 菌株、毒株和載體
            1.2.2 實驗動物
            1.2.3 主要試劑的配制
            1.2.4 主要儀器及設備
    2 方法
        2.1 DPV GJ基因生物信息學分析
            2.1.1 DPV gJ基因分子特性分析
            2.1.2 DPV gJ基因密碼子偏愛性分析
        2.2 DPV GJ基因原核表達及抗體制備
            2.2.1 PCR擴增鴨瘟病毒CHv株gJ基因
            2.2.2 gJ全基因及截段基因的T克隆
            2.2.3 DPV gJ全基因及截段基因表達質粒的構建
            2.2.4 重組蛋白的誘導表達及鑒定
            2.2.5 兔抗重組表達蛋白高免血清的制備與純化
    3 結果
        3.1 DPV GJ基因生物信息學分析
            3.1.1 核酸序列的分子特性分析
            3.1.2 蛋白質序列的分子特性分析
            3.1.3 DPV gJ基因密碼子偏愛性分析
        3.2 DPV GJ基因的原核表達、純化及其抗體制備
            3.2.1 目的基因的擴增及T克隆鑒定
            3.2.2 重組表達質粒的鑒定
            3.2.3 重組蛋白表達條件的優(yōu)化
            3.2.4 表達產物的鑒定及純化
            3.2.5 多克隆抗體的制備及鑒定
    4 討論
        4.1 DPV GJ基因生物信息學分析
        4.2 DPV GJ基因主要抗原域蛋白表達及抗體制備
三、結論
參考文獻
致謝
作者簡介及攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]大腸桿菌感受態(tài)細胞轉化能力影響因素的研究[J]. 糾敏,汪倫記,張敏.  安徽農學通報. 2007(16)
[2]影響偽狂犬病病毒同義密碼子用法特點的因素分析[J]. 殷華平,郭萬柱,徐志文,楊麗.  浙江大學學報(農業(yè)與生命科學版). 2007(03)
[3]偽狂犬病病毒基因編碼區(qū)堿基組成與密碼子使用偏差(英文)[J]. 馬相如,肖少波,方六榮,陳煥春.  遺傳學報. 2005(06)
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[6]活性部位的柔性[J]. 鄒承魯.  生理科學進展. 2001(01)
[7]一種簡單實用純化腹水McAb方法——辛酸/硫酸銨法[J]. 劉曉波,蔡美英,王霞,李喜榮.  華西醫(yī)科大學學報. 1999(04)

博士論文
[1]鴨瘟病毒gC基因的發(fā)現、原核表達和應用研究[D]. 徐超.四川農業(yè)大學 2008



本文編號：2996045