卵母細(xì)胞排卵后老化不僅是體外受精率低、胚胎發(fā)育差的重要原因,也是影響輔助生殖技術(shù)研究的原因。輔酶Q10（Coenzyme q10）是細(xì)胞線粒體中電子傳遞鏈和有氧呼吸的參與物質(zhì)之一,通過(guò)保護(hù)細(xì)胞免受自由基氧化損傷和降低細(xì)胞細(xì)胞凋亡從而在細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,而輔酶Q10在卵母細(xì)胞老化過(guò)程中的作用鮮有研究報(bào)道。因此研究輔酶Q10抑制小鼠卵母細(xì)胞排卵后體外老化的機(jī)制是非常有意義的。本研究以昆白小鼠超數(shù)排卵即注射hCG時(shí)13 h取的卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中建立氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?分別體外裸卵培養(yǎng)6 h、12 h、24 h并且在體外延長(zhǎng)培養(yǎng)的過(guò)程中在培養(yǎng)液里添加0μM、1μM、5μM、10μM不同濃度的輔酶Q10;采用胚胎活檢、孤雌激活、IVF-ET、免疫熒光染色（IF）等技術(shù),研究輔酶Q10在卵母細(xì)胞體外老化過(guò)程中的作用。結(jié)果表明,在體外延長(zhǎng)培養(yǎng)12小時(shí)后,卵母細(xì)胞碎裂程度較未老化卵母細(xì)胞明顯升高（93.07%vs.51.59%）;紡錘體異常率明顯升高（51.42%vs.10.25%）;卵母細(xì)胞膜電位降低、線粒體分布不均勻較明顯異常。并且老化老母細(xì)胞ATP合成量降低以及老化相關(guān)的SIR... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 卵母細(xì)胞排卵后老化的研究進(jìn)展
        1.1 排卵后卵母細(xì)胞老化的定義
        1.2 老化卵母細(xì)胞的細(xì)胞和分子變化
        1.3 排卵后老化對(duì)胚胎發(fā)育的影響
        1.4 老化卵母細(xì)胞中ROS升高的原因
            1.3.1 線粒體缺陷
            1.3.2 培養(yǎng)條件
            1.3.3 抗氧化能力和ROS代謝能力的降低
            1.3.4 Sirtuin家族蛋白表達(dá)變化
        1.5 預(yù)防排卵后老化的方法
            1.5.1 抗氧化劑處理
            1.5.2 線粒體替代療法
    第二章 輔酶Q10的研究進(jìn)展
        2.1 輔酶Q10 的介紹
        2.2 輔酶Q10 的生物活性
        2.3 輔酶Q10 抗氧化的作用機(jī)理
        2.4 輔酶Q10 與線粒體ATP產(chǎn)量的關(guān)系
        2.5 老化卵母細(xì)胞線粒體的異常
        2.6 SIRT4 研究進(jìn)展
        2.7 本研究的目的與意義
實(shí)驗(yàn)部分
    第三章 輔酶Q10對(duì)排卵后老化卵母細(xì)胞的影響
        3.1 試驗(yàn)材料
            3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            3.1.2 試驗(yàn)儀器設(shè)備
            3.1.3 藥品試劑
        3.2 試驗(yàn)方法
            3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑配制
            3.2.2 誘導(dǎo)超數(shù)排卵處理流程
            3.2.3 收集M2 時(shí)期卵母細(xì)胞
            3.2.4 精子的獲能及體外受精
            3.2.5 卵母細(xì)胞免疫熒光染色
            3.2.6 Annexin-V凋亡檢測(cè)
            3.2.7 數(shù)據(jù)分析
        3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.3.1 輔酶Q10 降低老化卵母細(xì)胞的碎裂程度
            3.3.2 輔酶Q10 降低老化卵母細(xì)胞中的ROS積累
            3.3.3 輔酶Q10 維持卵母細(xì)胞紡錘體的正常形態(tài)
            3.3.4 輔酶Q10 抑制排卵后卵母細(xì)胞老化過(guò)程中的細(xì)胞凋亡
            3.3.5 輔酶Q10 提高老化卵母細(xì)胞的囊胚率
        3.4 討論
    第四章 輔酶Q10對(duì)老化卵母細(xì)胞線粒體功能的影響
        4.1 試驗(yàn)材料
            4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            4.1.2 主要儀器設(shè)備
            4.1.3 主要試劑
        4.2 試驗(yàn)方法
            4.2.1 卵母細(xì)胞超排
            4.4.2 卵母細(xì)胞采集
            4.2.3 定量引物設(shè)計(jì)
            4.2.4 c DNA制備以及qRT-PCR
            4.2.5 蛋白Western Blot檢測(cè)
            4.2.6 卵母細(xì)胞ATP濃度測(cè)定
            4.2.7 卵母細(xì)胞線粒體膜電位檢測(cè)
            4.2.8 卵母細(xì)胞線粒體分布檢測(cè)
            4.4.9 干擾片段的設(shè)計(jì)與合成
            4.2.10 卵母細(xì)胞顯微注射
            4.2.11 數(shù)據(jù)分析
        4.3 試驗(yàn)結(jié)果
            4.3.1 輔酶Q10 提高老化卵母細(xì)胞線粒體膜電位ΔΨm
            4.3.2 輔酶Q10 維持老化卵母細(xì)胞中的線粒體的均勻分布
            4.3.3 輔酶Q10 維持老化卵母細(xì)胞中的ATP含量
            4.3.4 輔酶Q10 通過(guò)抑制SIRT4 的升高從而延緩排卵后卵母細(xì)胞的老化
        4.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：2994689