口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）引起的一種急性熱性高度傳染性疾病,主要感染豬牛羊等偶蹄動物。FMDV為單鏈正鏈RNA病毒,只有一個開放閱讀框,其中前導(dǎo)蛋白基因位于ORF的5’端；前導(dǎo)蛋白在影響病毒毒力方面發(fā)揮重要作用�？谔阋卟《厩皩�(dǎo)蛋白長度一般為201aa,國家口蹄疫參考實驗室分離到了三株具有不同長度前導(dǎo)蛋白的緬甸98系口蹄疫病毒,其中O/CHN/Mya98/33-P為200aa,O/CHN/Mya98/HN1為201aa,O/GSLX/2010為202aa。為研究三株口蹄疫病毒前導(dǎo)蛋白對病毒感染性的影響,本研究運用反向遺傳操作技術(shù),以O(shè)/CHN/93現(xiàn)用疫苗株的感染性克隆為骨架,分別構(gòu)建了含口蹄疫病毒中國分離株O/CHN/Mya98/33-P前導(dǎo)蛋白Lab、La及Lb的三個嵌合全長cDNA質(zhì)粒,含O/CHN/Mya98/HN1前導(dǎo)蛋白Lab、La及Lb的三個嵌合全長cDNA克隆,含O/GSLX/2010前導(dǎo)蛋白Lab、La的兩個嵌合全長cDNA克隆。這8個嵌合全長cDNA... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

口蹄疫病毒基因組結(jié)構(gòu)不意圖

嵌合病毒毒力下降的根本原因還不是很清楚(Piccone M. E.et al.，20ir)。在構(gòu)建LP?缺失型cDNA克隆時(如圖1.2所示），必須保留兩個起始密碼子及其之間的序列，病毒才能夠被拯救，這表明兩起始密碼子之間的區(qū)域可能與細胞內(nèi)調(diào)控翻譯的因子相互作用；但是只缺失兩個起始密碼子之間區(qū)域的序列，可以拯救到完整的活病毒粒子，只是其病毒的復(fù)制水■平相對于未缺失的原毒有所下降。完全缺失L蛋白基因序列不能夠拯救到活的病毒粒子，但是單純?nèi)笔b區(qū)域或者兩個起始密碼子之間的序列能夠拯救到活的病毒粒子，表明L蛋白的編碼序列能夠影響病毒病毒的復(fù)制(Belsham G let al.,2013),但是其影響病毒復(fù)制的分子機制還不是很清楚。Lab Lb 在BHK_2彳細胞內(nèi)的接救情況Ay/5 FMDV A Lab 一FMDV A Lb MJG^i^UG +FMDV LbAUGmut tlGG +AUG ——^~- 丄FMDV A Labspacer ’"”_______—圖1. 2不同L蛋白缺失型感染性克隆示意圖及其在BHK-21細胞內(nèi)被極救的情況Fig.2 Different Foot and Mouth Disease Virus Leader Protein Deleted Infectious Clone and the situationof its rescue in BHK-21wtFMDV:野生型全長FMDVcDNA克��；FMDVALab:缺失全部Lab的FMDV cDNA克隆；FMDVALb:只缺失Lb的FMDV cDNA克�。篎MDVALbAUGmut：第一個起始密碼子突變?yōu)閁GG

圖1.3 L蛋白的高級結(jié)構(gòu)及關(guān)鍵性氣基酸Fig. 1.3 The tertiary structure of leader protein and its critical amino acid1.2.3 l/r"影響病毒的毒力利用基因工程缺失L基因的FMDV相比野生型FMDV表現(xiàn)出微小的細胞病變反應(yīng)，缺失


本文編號：2992012