本研究利用外源導(dǎo)入糖皮質(zhì)激素的方法，從體內(nèi)和體外兩個(gè)試驗(yàn)?zāi)Ｐ吞接懱瞧べ|(zhì)激素對(duì)家禽骨骼肌葡萄糖代謝機(jī)制的研究�；铙w試驗(yàn)：一方面通過(guò)分離肌肉細(xì)胞粗膜、細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)膜，探討葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體候選蛋白的移位情況；另一方面通過(guò)外源導(dǎo)入糖皮質(zhì)激素的方法，建立應(yīng)激模型，研究了糖皮質(zhì)激素和日糧氨基酸對(duì)肉仔雞葡萄糖代謝的影響，以及糖皮質(zhì)激素、日糧氨基酸及急性灌服葡萄糖對(duì)葡萄糖代謝的交互影響，初步探討了糖皮質(zhì)激素調(diào)控骨骼肌葡萄糖代謝的機(jī)制。離體試驗(yàn)：培養(yǎng)雞胚成肌細(xì)胞，通過(guò)外源添加特異性抑制劑的方法，研究胰島素利用MAPK/ERK2途徑激活p70S6K、mTOR和PKB/Akt調(diào)控家禽骨骼肌葡萄糖代謝的可能性。試驗(yàn)一包括三個(gè)小試驗(yàn)：試驗(yàn)1隨機(jī)挑選體重相近0日齡的AA肉仔雞150只，分為兩個(gè)處理：基礎(chǔ)日糧添加2.05%L-丙氨酸組和基礎(chǔ)日糧添加1%L-精氨酸組。飼養(yǎng)至7日齡，每組挑選體重相近的肉仔雞112只，設(shè)2個(gè)小處理：糖皮質(zhì)激素組和對(duì)照組，每個(gè)小處理7個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4只雞。8--14日齡每天8:00和20:00，糖皮質(zhì)激素組腹部皮下注射DEX （1mg/Kg BM），對(duì)照組注射與糖皮質(zhì)激素組等體積的生理... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

哺乳動(dòng)物的胰島素受體（IR）信號(hào)通路（Taniguchietal,2006）

成肌細(xì)胞：吸取界面處細(xì)胞加入另一離心管中。加入適量 D-Hanks 吹打心 8min，棄上清。加入含胎牛血清的培養(yǎng)液，混勻至一管中。加 D-Hanks 目的是降低 Percoll 濃度，若離心一次未得到細(xì)胞沉淀，可s 離心。：取 100ul 細(xì)胞液，再加 100ul 臺(tái)盼藍(lán)，混勻，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。：根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，將細(xì)胞懸液加入一定量培養(yǎng)液，15%的胎牛血清。種ml 左右，放入 37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。六孔板每孔加入 2ml 培養(yǎng)基。液：種板后，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)觀察貼壁情況。平均兩天換一次液。

P-p70 P-mTOR P-Akt P-ERKP 0.0061 0.0239 0.0281 0.9798圖 4 胰島素處理對(duì)雞成肌細(xì)胞葡萄糖代謝通路的影響Fig.4 The phosphorylation of p70S6K, mTOR and Akt by chicken embryonic myoblasts exposed to insulin3.2.2 MEK 抑制劑處理對(duì)雞成肌細(xì)胞葡萄糖代謝通路的影響如圖 5 所示，相比正常培養(yǎng)基培養(yǎng)的成肌細(xì)胞，胰島素處理顯著的激活了 p70S6Thr389和 Akt Ser473位點(diǎn)的磷酸化水平，對(duì) mTOR Ser2448和 ERK Tyr204位點(diǎn)有激活趨勢(shì)；在培養(yǎng)基中加入不同濃度的 MEK 抑制劑（U0126）后，MEK 抑制劑顯著地制了胰島素誘導(dǎo)的 p70S6K Thr389、 mTOR Ser2448和 Akt Ser473位點(diǎn)的磷酸化水平，時(shí)對(duì) ERK Tyr204位點(diǎn)的磷酸化水平有抑制的趨勢(shì)，但沒(méi)達(dá)到顯著效果。


本文編號(hào)：2990308