為提高口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV）病毒樣顆粒（Virus-likeparticles,VLPs）的特異性識別和遞呈,為靶向疫苗研究奠定基礎(chǔ),利用反向PCR技術(shù),將卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）第257–264位氨基酸（Amino acids,aa）的短肽嵌入FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP3第171–172位aa或第173–174位aa,通過大腸桿菌表達(dá)FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP0、VP1和嵌合型VP3,體外組裝得到嵌合OVA257-264肽的病毒樣顆粒（VLPOVA）。用動態(tài)光散射、透射電鏡檢測VLPOVA大小和形態(tài),免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附試驗和激光共聚焦顯微鏡檢測短肽的嵌入情況。結(jié)果顯示在VP3的第173–174位aa嵌入OVA,不影響蛋白表達(dá)和VLPs的組裝且OVA位于VLPOVA的表面,VLPOVA粒徑比VLPs稍大。 

【文章來源】：生物工程學(xué)報. 2020,36(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

重組蛋白的Western blotting分析

ELISA法檢測重組蛋白和VLPOVA中的OVA257-264

為了進一步確定OVA257-264肽正確嵌入VP3蛋白中，分別用培養(yǎng)基、VP3、VP3OVA173、VLPs和VLPOVA刺激培養(yǎng)第5天的BMDCs，培養(yǎng)24 h后，依次用豬血清、FITC標(biāo)記的兔抗豬IgG抗體、APC抗鼠OVA257-264(SIINFEKL)肽連接H-2Kb抗體孵育細(xì)胞。激光共聚焦顯微鏡對FMDV結(jié)構(gòu)蛋白和OVA257-264肽進行定位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅在VP3OVA173蛋白和VLPOVA中綠色熒光的結(jié)構(gòu)蛋白和紅色熒光的OVA257-264肽發(fā)生共定位，而VP3蛋白和VLPs中只檢測到綠色熒光的結(jié)構(gòu)蛋白(圖4)，證明短肽正確嵌入FMDV VP3，且隨VP3蛋白酶切、組裝到VLPOVA。3 討論

【參考文獻】：
期刊論文
[1]VP3 G–H環(huán)中氨基酸突變對O型口蹄疫病毒生物學(xué)特性的影響[J]. 陳冬冬,白興文,宮曉華,包慧芳,李平花,李冬,付元芳,白啟峰,袁紅,孫普,馬雪青,曹軼梅,陳應(yīng)理,盧曾軍,劉在新.  微生物學(xué)報. 2019(07)

碩士論文
[1]口蹄疫病毒VP3定點突變體的構(gòu)建及其生物學(xué)特性和免疫血清學(xué)研究[D]. 陳冬冬.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2018



本文編號：2986461