為建立非洲馬瘟病毒（AHSV）可視化RT-LAMP檢測(cè)方法,本研究根據(jù)AHSV外衣殼蛋白（VP7）基因保守序列設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物,通過反應(yīng)條件優(yōu)化建立了AHSV可視化RT-LAMP檢測(cè)方法。結(jié)果顯示,本實(shí)驗(yàn)所建立RT-LAMP方法的最佳反應(yīng)條件為62℃1 h;利用該方法檢測(cè)進(jìn)口滅活凍干疫苗中的9個(gè)血清型AHSV以及馬流感病毒、馬傳貧病毒、馬動(dòng)脈炎病毒和藍(lán)舌病病毒的RNA,結(jié)果顯示所有血清型AHSV RNA檢測(cè)均為陽性,其它病毒RNA檢測(cè)為陰性,該方法特異性較強(qiáng);該方法最低可檢測(cè)到3.2×10^-9ng/μL的RNA,敏感性是普通RT-PCR方法的1 000倍。利用建立的RT-LAMP方法和普通RT-PCR方法對(duì)35份馬血和5份驢血樣品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示二者陽性和陰性符合率均為100%。本研究在國內(nèi)外首次建立了AHSV 9種血清型的可視化RT-LAMP檢測(cè)方法,其具有特異性強(qiáng)、敏感性高、快速和高通量檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn),為非洲馬瘟（AHS）快速的可視化現(xiàn)場(chǎng)診斷提供可行方法。 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

AHSV RT-LAMP最佳反應(yīng)體系和反應(yīng)條件下的試驗(yàn)結(jié)果

AHSV RT-LAMP特異性試驗(yàn)結(jié)果

用建立的RT-LAMP方法和RT-PCR方法同時(shí)對(duì)不同稀釋度AHSV RNA樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示RT-LAMP最低RNA檢測(cè)濃度為3.2×10-9ng/μL（圖3 A、B);RT-PCR最低檢測(cè)RNA濃度為3.2×10-6ng/μL（圖3C),RT-LAMP敏感性為RT-PCR的1 000倍。表明該RT-LAMP的敏感性較高。2.4 臨床樣品檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小反芻獸疫病毒可視化RT-LAMP檢測(cè)方法的建立[J]. 李富祥,楊仕標(biāo),趙文華,李華春.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2018(12)
[2]非洲馬瘟病毒RT-LAMP檢測(cè)方法的建立[J]. 姜睿姣,鄔旭龍,張鵬飛,王印,楊澤曉,姚學(xué)萍.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(12)
[3]3型鴨甲型肝炎病毒逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)方法的建立[J]. 張映,范書才,張兵,陳玲,秦義嫻.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(12)
[4]非洲馬瘟病毒TaqMan探針熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 趙文華,楊仕標(biāo),李富祥.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2013(11)
[5]非洲馬瘟病毒群特異性RT-PCR檢測(cè)方法的研究[J]. 趙文華,楊仕標(biāo),王金萍,李富祥.  生物技術(shù)通報(bào). 2011(04)



本文編號(hào)：2986307