親吻素（Kissl）和卵泡刺激素受體（Follicle Stimulating Hormone Receptor, FSHR）基因?qū)Ξa(chǎn)仔數(shù)有顯著影響,在家畜繁殖生理學(xué)領(lǐng)域占有重要地位。Kissl是公認的下丘腦促性腺激素釋放激素（Gonadotropin Releasing Hormone, GnRH）上游重要調(diào)控因子,在性腺軸系統(tǒng)中起中樞節(jié)點的作用,能直接作用于GnRH神經(jīng)元,刺激GnRH的分泌,激活性腺軸,并且在發(fā)情周期內(nèi)正向調(diào)控黃體生成素（Luteinizing Hormone, LH）和卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone, FSH）的分泌。在雌性哺乳動物中,卵泡刺激素的主要作用是促進性腺發(fā)育和維持正常的生殖功能,促進卵巢中卵泡的生長、卵泡顆粒細胞的增生和雌激素的合成與分泌,刺激卵泡細胞上LH受體的產(chǎn)生。它對卵泡生長發(fā)育和成熟分化起重要調(diào)控作用,直接影響卵泡發(fā)育的數(shù)量和質(zhì)量,而FSHR是FSH發(fā)揮生理功能不可或缺的重要因素。本文旨在探究Kissl和FSHR基因與繁殖功能之間的關(guān)系,以豬的Kissl和FSHR基因為研究對象,將構(gòu)建的小鼠腦部特異表達的... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略表
目錄
第一章 文獻綜述
    1 引言
        1.1 Kiss1/GPR54基因的定義
        1.2 Kiss1/GPR54系統(tǒng)的分布
        1.3 Kiss1/GPR54系統(tǒng)與繁殖系統(tǒng)的關(guān)系
            1.3.1 Kiss1/GPR54系統(tǒng)與生殖系統(tǒng)發(fā)育
            1.3.2 Kisspeptin/GPR54在下丘腦的表達
            1.3.3 Kiss1和Kisspeptin在其他部位的表達
        1.4 FSHR的研究概況
            1.4.1 FSHR的定義與結(jié)構(gòu)
            1.4.2 FSHR的生理功能
        1.5 pCaMKⅡ啟動子的研究進展
        1.6 轉(zhuǎn)基因動物研究進展
            1.6.1 轉(zhuǎn)基因動物研究概況
            1.6.2 轉(zhuǎn)基因動物制備方法
                1.6.2.1 原核顯微注射技術(shù)
                1.6.2.2 慢病毒載體法
                1.6.2.3 體細胞核移植法
                1.6.2.4 RNAi介導(dǎo)的基因沉默
            1.6.3 轉(zhuǎn)基因動物研究展望
        1.7 課題來源與研究背景
第二章 豬Kiss1基因克隆及真核表達載體pCaMKⅡ-Kiss1和AMH-pFSHR的構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
            1.1.1 菌種與質(zhì)粒來源
            1.1.2 引物、工具酶及其他試劑
            1.1.3 其他相關(guān)試劑配制
        1.2 實驗方法
            1.2.1 豬Kiss1基因的克隆及鑒定
                1.2.1.1 豬下丘腦總RNA提取
                1.2.1.2 豬Kiss1基因的擴增
                1.2.1.3 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
                1.2.1.4 菌液PCR擴增目的基因
                1.2.1.5 質(zhì)粒DNA提取
                1.2.1.6 酶切鑒定
            1.2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核載體構(gòu)建
                1.2.2.1 pCaMKⅡ載體的鑒定
                1.2.2.2 pCaMKⅡ載體和pMD19-T-Kiss1載體酶切鑒定
                1.2.2.3 重組載體pCaMKⅡ-Kiss1的構(gòu)建
                1.2.2.4 質(zhì)粒DNA提取
            1.2.3 AMH-pFSHR真核表達載體的雙酶切鑒定
            1.2.4 重組質(zhì)粒的線性化
    2 結(jié)果與分析
        2.1 豬Kiss1基因的克隆
        2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核載體構(gòu)建
        2.3 AMH-pFSHR真核表達載體的構(gòu)建
    3 討論
第三章 原核顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因小鼠及其鑒定
    1 轉(zhuǎn)基因小鼠的制備的材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 雌鼠發(fā)情周期的判斷
            1.1.3 小鼠的超排
            1.1.4 受精卵獲取
            1.1.5 受精卵的移植
        1.2 轉(zhuǎn)基因小鼠制備
            1.2.1 轉(zhuǎn)基因小鼠制備流程圖
    2 轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
        2.1 材料與方法
            2.1.1 實驗材料
                2.1.1.1 引物和探針
                2.1.1.2 相關(guān)試劑的配制
            2.1.2 實驗方法
                2.1.2.1 鼠尾組織DNA提取
                2.1.2.2 Southern blot檢測
                2.1.2.3 Gonome Walking
    3 結(jié)果與分析
        3.1 轉(zhuǎn)基因小鼠的PCR檢測與Southern blot驗證
        3.2 轉(zhuǎn)基因小鼠Genome Walking驗證
        3.3 轉(zhuǎn)基因小鼠子代產(chǎn)仔數(shù)統(tǒng)計
    4 討論
全文結(jié)論
參考文獻
附錄1 顯微注射豬Kiss1基因的DNA序列（8456bp）
附錄2 顯微注射豬FSHR基因的DNA序列（5844bp）
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]CaMKⅡα基因啟動子的克隆和神經(jīng)細胞特異性Cre表達載體的構(gòu)建[J]. 徐瑛,周常文,林炤華,柯琦.  中國優(yōu)生與遺傳雜志. 2008(03)
[2]小鼠發(fā)情周期觀察與最佳超排時期的確定[J]. 傅文棟,孫玉成,索倫,高建明.  北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報. 2005(02)



本文編號：2979260