黃芪多糖脂質(zhì)體免疫增強(qiáng)劑的研究與應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間:2021-01-15 09:43
黃芪多糖是中藥黃芪的主要有效成分之一,具有提高免疫力、抗腫瘤、抗氧化、抗菌和抗癌等作用。脂質(zhì)體作為一種新型的給藥載體,具有靶向釋藥、緩釋、無(wú)免疫原性、降低藥物毒副作用,提高生物利用度等優(yōu)勢(shì),近年來(lái)作為藥物載體已被廣泛應(yīng)用。本研究選擇黃芪多糖脂質(zhì)體(APSL)為研究對(duì)象,優(yōu)化了APSL的制備工藝,測(cè)定了APSL的體外、體內(nèi)增強(qiáng)免疫活性和增強(qiáng)免疫的作用機(jī)理,并實(shí)際應(yīng)用到雞新城疫和豬瘟的免疫。本研究的目的,旨在探討黃芪多糖和脂質(zhì)體的協(xié)同增強(qiáng)免疫作用,開(kāi)發(fā)新型免疫增強(qiáng)劑,提高畜禽疫苗的免疫效果。研究分為以下6個(gè)部分:試驗(yàn)Ⅰ、黃芪多糖脂質(zhì)體制備工藝的優(yōu)化 采用薄膜分散-微孔濾膜擠壓法制備黃芪多糖脂質(zhì)體,以包封率和載藥量為指標(biāo),以脂藥比、膜材比和超聲時(shí)間為因素水平,用L9(34)正交設(shè)計(jì)對(duì)制備條件進(jìn)行優(yōu)選,用魚(yú)精蛋白法測(cè)定黃芪多糖脂質(zhì)體的包封率,并用透射電鏡測(cè)定其形態(tài)和粒徑。結(jié)果顯示,薄膜分散-微孔濾膜擠壓法制備黃芪多糖脂質(zhì)體的最佳條件為脂藥比為10:1,膜材比8:1,超聲時(shí)間為20 min。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明,采用最佳條件制備的黃芪多糖脂質(zhì)體包封率和載藥量較高,形態(tài)和粒徑較均勻,重現(xiàn)性好。試驗(yàn)Ⅱ、...
【文章來(lái)源】:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:90 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
第一章 免疫增強(qiáng)劑研究進(jìn)展
1 免疫增強(qiáng)劑的概念
2 免疫增強(qiáng)劑的標(biāo)準(zhǔn)
3 免疫增強(qiáng)劑的作用機(jī)理
4 免疫增強(qiáng)劑的分類(lèi)
5 常用免疫增強(qiáng)劑
5.1 鋁佐劑
5.2 油乳佐劑
5.3 細(xì)胞因子
5.4 轉(zhuǎn)移因子
5.5 細(xì)菌CpG-DNA
5.6 納米佐劑
5.7 中藥類(lèi)免疫增強(qiáng)劑
5.8 脂質(zhì)體
5.9 免疫刺激復(fù)合物
5.10 其他
參考文獻(xiàn)
第二章 脂質(zhì)體的研究進(jìn)展
1 脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)
2 脂質(zhì)體的制備
2.1 注入法
2.2 薄膜分散法
2.3 超聲波分散法
2.4 逆相蒸發(fā)法
2.5 凍干法
2.6 高壓乳勻法
2.7 鈣融合法
2.8 其他
3 脂質(zhì)體的作用特點(diǎn)
4 脂質(zhì)體在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
4.1 作為疫苗佐劑
4.2 作為藥物載體
5 新型脂質(zhì)體的研究
參考文獻(xiàn)
第三章 黃芪多糖的研究進(jìn)展
1 黃芪的化學(xué)成分
2 黃芪的藥理作用
2.1 調(diào)節(jié)心血管
2.2 增強(qiáng)免疫
2.3 抗腫瘤
2.4 其他作用
3 黃芪多糖的增強(qiáng)免疫作用
3.1 增強(qiáng)細(xì)胞免疫
3.2 增強(qiáng)體液免疫
3.3 促進(jìn)免疫器官發(fā)育
3.4 其他
4 黃芪多糖在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用
5 黃芪多糖脂質(zhì)體的研究
參考文獻(xiàn)
試驗(yàn)研究
第四章 正交試驗(yàn)優(yōu)化黃芪多糖脂質(zhì)體的制備工藝
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器設(shè)備
1.4 黃芪多糖(APS)的制備
1.5 脂質(zhì)體制備工藝影響因素的考察
1.6 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化脂質(zhì)體處方
1.7 APS脂質(zhì)體的制備
1.8 APS脂質(zhì)體包封率和載藥量的測(cè)定
1.9 APS脂質(zhì)體中糖含量的測(cè)定
2 結(jié)果與分析
2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果分析
2.2 APS脂質(zhì)體形態(tài)及粒徑測(cè)定結(jié)果
2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)
3 討論
參考文獻(xiàn)
第五章 黃芪多糖脂質(zhì)的體外增強(qiáng)免疫活性的測(cè)定
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器
1.4 T淋巴細(xì)胞增殖的測(cè)定
1.5 B淋巴細(xì)胞增殖的測(cè)定
1.9 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
2.1 APSL單獨(dú)作用時(shí)T淋巴細(xì)胞增殖的變化
2.2 APSL與PHA共同作用時(shí)T淋巴細(xì)胞增殖的變化
2.3 APSL單獨(dú)作用時(shí)B淋巴細(xì)胞增殖的變化
2.4 APSL與LPS共同作用時(shí)B淋巴細(xì)胞增殖的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第六章 黃芪多糖脂質(zhì)體的體內(nèi)增強(qiáng)活性的測(cè)定
1 材料與方法
1.1 黃芪多糖脂質(zhì)體的制備
1.2 疫苗
1.3 動(dòng)物分組及處理
1.4 血清HI抗體效價(jià)測(cè)定
1.5 血清細(xì)胞因子測(cè)定
1.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 淋巴細(xì)胞增殖變化
2.2 抗體效價(jià)變化
2.3 血清IFN-γ濃度的變化
2.4 血清IL-2濃度的變化
2.5 血清IL-4濃度的變化
2.6 血清IL-10濃度的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第七章 黃芪多糖脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞因子的影響
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器設(shè)備
1.4 四種細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的測(cè)定
1.4.1 雞外周血T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)
1.4.2 細(xì)胞中總RNA的提取
1.4.3 反轉(zhuǎn)錄(RT)
1.4.4 PCR引物的設(shè)計(jì)
1.4.5 Real-time PCR測(cè)定
1.5 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 反應(yīng)條件的優(yōu)化
2.2 IFN-γmRNA表達(dá)量的變化
2.3 IL-2 mRNA表達(dá)量的變化
2.4 IL-4 mRNA表達(dá)量的變化
2.5 IL-10 mRNA表達(dá)量的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第八章 黃芪多糖脂質(zhì)體在雞新城疫免疫中的應(yīng)用
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 新城疫疫苗及檢測(cè)抗原
1.3 主要試劑及儀器
1.4 動(dòng)物及分組處理
1.5 血清抗體效價(jià)的測(cè)定
1.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 A場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
2.2 B場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第九章 黃芪多糖脂質(zhì)體在豬瘟免疫中的應(yīng)用
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 疫苗
1.3 主要試劑及儀器
1.4 動(dòng)物及分組處理
1.5 血清抗體效價(jià)的測(cè)定
1.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 A場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
2.2 B場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]脂質(zhì)體給藥載體的應(yīng)用及質(zhì)量評(píng)定[J]. 郭會(huì)燦. 科技信息. 2012(16)
[2]黃芪多糖在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 侯玉潔,張建剛,侯小輝,趙國(guó)琦. 廣東飼料. 2012(05)
[3]姬松茸多糖對(duì)大鼠脾臟細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響[J]. 孟俊龍,馮翠萍,程紅艷,常明昌,王將,李海杰. 中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2012(04)
[4]獸用中草藥免疫增強(qiáng)劑對(duì)豬瘟疫苗免疫效果影響的研究[J]. 閆益波,張玉換,李文剛,韓一超,關(guān)超,王福傳. 中國(guó)豬業(yè). 2012(04)
[5]脂質(zhì)體在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 李祥,杜俊,向小四,唐甜甜,胡雄彬,向大雄. 中南藥學(xué). 2012(04)
[6]增強(qiáng)CpG免疫刺激作用途徑的研究進(jìn)展[J]. 徐娜,張雪梅,王欽富. 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2012(02)
[7]獸用免疫佐劑的研究進(jìn)展[J]. 高澤乾,孫建男,武煒,李成會(huì). 唐山師范學(xué)院學(xué)報(bào). 2012(02)
[8]巴氏蘑菇多糖對(duì)鉛中毒大鼠脾臟細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響[J]. 程紅艷,常鼎然,馮翠萍,常明昌,王將,李海杰,李越. 菌物學(xué)報(bào). 2012(02)
[9]CpG聯(lián)合鋁佐劑對(duì)HCV免疫原體液免疫作用的影響[J]. 湛娜,修冰水,王國(guó)華,陳堃,白冠中,宋曉國(guó),朱翠霞,戴振華,楊錫琴,張賀秋. 生物技術(shù)通訊. 2011(06)
[10]淫羊藿多糖脂質(zhì)體制備條件的優(yōu)選[J]. 高煥,高琪,王德云,范云鵬,郭利偉,趙曉娜. 中藥材. 2011(09)
碩士論文
[1]納米鋁佐劑的制備及其輔佐HBsAg的免疫學(xué)效應(yīng)研究[D]. 何萍.第三軍醫(yī)大學(xué) 2004
[2]脂質(zhì)體作為干擾素-α載體的研究[D]. 葉志偉.浙江大學(xué) 2003
本文編號(hào):2978683
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【文章頁(yè)數(shù)】:90 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
第一章 免疫增強(qiáng)劑研究進(jìn)展
1 免疫增強(qiáng)劑的概念
2 免疫增強(qiáng)劑的標(biāo)準(zhǔn)
3 免疫增強(qiáng)劑的作用機(jī)理
4 免疫增強(qiáng)劑的分類(lèi)
5 常用免疫增強(qiáng)劑
5.1 鋁佐劑
5.2 油乳佐劑
5.3 細(xì)胞因子
5.4 轉(zhuǎn)移因子
5.5 細(xì)菌CpG-DNA
5.6 納米佐劑
5.7 中藥類(lèi)免疫增強(qiáng)劑
5.8 脂質(zhì)體
5.9 免疫刺激復(fù)合物
5.10 其他
參考文獻(xiàn)
第二章 脂質(zhì)體的研究進(jìn)展
1 脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)
2 脂質(zhì)體的制備
2.1 注入法
2.2 薄膜分散法
2.3 超聲波分散法
2.4 逆相蒸發(fā)法
2.5 凍干法
2.6 高壓乳勻法
2.7 鈣融合法
2.8 其他
3 脂質(zhì)體的作用特點(diǎn)
4 脂質(zhì)體在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
4.1 作為疫苗佐劑
4.2 作為藥物載體
5 新型脂質(zhì)體的研究
參考文獻(xiàn)
第三章 黃芪多糖的研究進(jìn)展
1 黃芪的化學(xué)成分
2 黃芪的藥理作用
2.1 調(diào)節(jié)心血管
2.2 增強(qiáng)免疫
2.3 抗腫瘤
2.4 其他作用
3 黃芪多糖的增強(qiáng)免疫作用
3.1 增強(qiáng)細(xì)胞免疫
3.2 增強(qiáng)體液免疫
3.3 促進(jìn)免疫器官發(fā)育
3.4 其他
4 黃芪多糖在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用
5 黃芪多糖脂質(zhì)體的研究
參考文獻(xiàn)
試驗(yàn)研究
第四章 正交試驗(yàn)優(yōu)化黃芪多糖脂質(zhì)體的制備工藝
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器設(shè)備
1.4 黃芪多糖(APS)的制備
1.5 脂質(zhì)體制備工藝影響因素的考察
1.6 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化脂質(zhì)體處方
1.7 APS脂質(zhì)體的制備
1.8 APS脂質(zhì)體包封率和載藥量的測(cè)定
1.9 APS脂質(zhì)體中糖含量的測(cè)定
2 結(jié)果與分析
2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果分析
2.2 APS脂質(zhì)體形態(tài)及粒徑測(cè)定結(jié)果
2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)
3 討論
參考文獻(xiàn)
第五章 黃芪多糖脂質(zhì)的體外增強(qiáng)免疫活性的測(cè)定
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器
1.4 T淋巴細(xì)胞增殖的測(cè)定
1.5 B淋巴細(xì)胞增殖的測(cè)定
1.9 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
2.1 APSL單獨(dú)作用時(shí)T淋巴細(xì)胞增殖的變化
2.2 APSL與PHA共同作用時(shí)T淋巴細(xì)胞增殖的變化
2.3 APSL單獨(dú)作用時(shí)B淋巴細(xì)胞增殖的變化
2.4 APSL與LPS共同作用時(shí)B淋巴細(xì)胞增殖的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第六章 黃芪多糖脂質(zhì)體的體內(nèi)增強(qiáng)活性的測(cè)定
1 材料與方法
1.1 黃芪多糖脂質(zhì)體的制備
1.2 疫苗
1.3 動(dòng)物分組及處理
1.4 血清HI抗體效價(jià)測(cè)定
1.5 血清細(xì)胞因子測(cè)定
1.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 淋巴細(xì)胞增殖變化
2.2 抗體效價(jià)變化
2.3 血清IFN-γ濃度的變化
2.4 血清IL-2濃度的變化
2.5 血清IL-4濃度的變化
2.6 血清IL-10濃度的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第七章 黃芪多糖脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞因子的影響
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器設(shè)備
1.4 四種細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的測(cè)定
1.4.1 雞外周血T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)
1.4.2 細(xì)胞中總RNA的提取
1.4.3 反轉(zhuǎn)錄(RT)
1.4.4 PCR引物的設(shè)計(jì)
1.4.5 Real-time PCR測(cè)定
1.5 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 反應(yīng)條件的優(yōu)化
2.2 IFN-γmRNA表達(dá)量的變化
2.3 IL-2 mRNA表達(dá)量的變化
2.4 IL-4 mRNA表達(dá)量的變化
2.5 IL-10 mRNA表達(dá)量的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第八章 黃芪多糖脂質(zhì)體在雞新城疫免疫中的應(yīng)用
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 新城疫疫苗及檢測(cè)抗原
1.3 主要試劑及儀器
1.4 動(dòng)物及分組處理
1.5 血清抗體效價(jià)的測(cè)定
1.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 A場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
2.2 B場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
第九章 黃芪多糖脂質(zhì)體在豬瘟免疫中的應(yīng)用
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)藥物
1.2 疫苗
1.3 主要試劑及儀器
1.4 動(dòng)物及分組處理
1.5 血清抗體效價(jià)的測(cè)定
1.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
2.1 A場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
2.2 B場(chǎng)血清抗體效價(jià)的變化
3 討論
參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
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【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]脂質(zhì)體給藥載體的應(yīng)用及質(zhì)量評(píng)定[J]. 郭會(huì)燦. 科技信息. 2012(16)
[2]黃芪多糖在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 侯玉潔,張建剛,侯小輝,趙國(guó)琦. 廣東飼料. 2012(05)
[3]姬松茸多糖對(duì)大鼠脾臟細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響[J]. 孟俊龍,馮翠萍,程紅艷,常明昌,王將,李海杰. 中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2012(04)
[4]獸用中草藥免疫增強(qiáng)劑對(duì)豬瘟疫苗免疫效果影響的研究[J]. 閆益波,張玉換,李文剛,韓一超,關(guān)超,王福傳. 中國(guó)豬業(yè). 2012(04)
[5]脂質(zhì)體在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 李祥,杜俊,向小四,唐甜甜,胡雄彬,向大雄. 中南藥學(xué). 2012(04)
[6]增強(qiáng)CpG免疫刺激作用途徑的研究進(jìn)展[J]. 徐娜,張雪梅,王欽富. 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2012(02)
[7]獸用免疫佐劑的研究進(jìn)展[J]. 高澤乾,孫建男,武煒,李成會(huì). 唐山師范學(xué)院學(xué)報(bào). 2012(02)
[8]巴氏蘑菇多糖對(duì)鉛中毒大鼠脾臟細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響[J]. 程紅艷,常鼎然,馮翠萍,常明昌,王將,李海杰,李越. 菌物學(xué)報(bào). 2012(02)
[9]CpG聯(lián)合鋁佐劑對(duì)HCV免疫原體液免疫作用的影響[J]. 湛娜,修冰水,王國(guó)華,陳堃,白冠中,宋曉國(guó),朱翠霞,戴振華,楊錫琴,張賀秋. 生物技術(shù)通訊. 2011(06)
[10]淫羊藿多糖脂質(zhì)體制備條件的優(yōu)選[J]. 高煥,高琪,王德云,范云鵬,郭利偉,趙曉娜. 中藥材. 2011(09)
碩士論文
[1]納米鋁佐劑的制備及其輔佐HBsAg的免疫學(xué)效應(yīng)研究[D]. 何萍.第三軍醫(yī)大學(xué) 2004
[2]脂質(zhì)體作為干擾素-α載體的研究[D]. 葉志偉.浙江大學(xué) 2003
本文編號(hào):2978683
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