體細(xì)胞克隆技術(shù)在理論和實(shí)踐上都具有巨大的價(jià)值，但目前克隆效率普遍低下，這已成為制約克隆技術(shù)在生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用的主要原因。為提高體細(xì)胞克隆的效率，研究人員對(duì)克隆技術(shù)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行了優(yōu)化。其中，培養(yǎng)液的優(yōu)化是研究的熱點(diǎn)之一。白藜蘆醇作為抗氧化劑，能夠幫助調(diào)節(jié)胚胎細(xì)胞發(fā)育狀態(tài)和凋亡；表皮生長因子（EGF）、胰島素樣生長因子（IGF）已經(jīng)被證實(shí)能夠?qū)εＥ咛グl(fā)育起促進(jìn)作用；轉(zhuǎn)鐵蛋白和礦物元素同樣也是胚胎發(fā)育所必須的；同時(shí)，許多促進(jìn)重編程的因子也被添加到胚胎體外培養(yǎng)體系中來。本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上，針對(duì)胚胎培養(yǎng)體系高氧化壓力導(dǎo)致的胚胎發(fā)育損傷問題，以孤雌生殖和體外受精胚胎為模型，利用EGF、ITS作為血清替代物，添加白藜蘆醇研制新型限定培養(yǎng)液，同時(shí)也為下一步將其應(yīng)用于體細(xì)胞克隆胚胎奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：1.以孤雌生殖胚胎和體外受精胚胎為模型，探究白藜蘆醇對(duì)牛胚胎體外發(fā)育能力的作用。篩選出了0.5μM為促進(jìn)胚胎發(fā)育的最適濃度，發(fā)現(xiàn)其能夠加速胚胎卵裂，促進(jìn)囊胚形成；能夠增加牛胚胎體外發(fā)育囊胚細(xì)胞數(shù)、增加內(nèi)細(xì)胞團(tuán)比例；能夠上調(diào)凋亡抑制基因Bcl-2和下調(diào)凋亡促進(jìn)基因Bax，降低囊胚... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 體細(xì)胞核移植
    1.2 影響體細(xì)胞核移植效率的因素
    1.3 體細(xì)胞核移植的重編程
    1.4 胚胎體外培養(yǎng)體系
        1.4.1 胚胎培養(yǎng)液
        1.4.2 無血清培養(yǎng)液
    1.5 白藜蘆醇
第二章 白藜蘆醇對(duì)牛胚胎體外發(fā)育的影響
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 試劑耗材與配方
        2.1.4 卵母細(xì)胞的采集及體外成熟培養(yǎng)
        2.1.5 孤雌激活
        2.1.6 體外受精
        2.1.7 囊胚差異染色及細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.1.8 囊胚凋亡染色
        2.1.9 胚胎發(fā)育各時(shí)期 ROS 水平檢測
        2.1.10 免疫熒光強(qiáng)度分析
        2.1.11 胚胎 cDNA 的提取獲得
        2.1.12 RT-PCR 檢測
        2.1.13 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 白藜蘆醇對(duì)牛孤雌激活胚胎體外發(fā)育率的影響
        2.2.2 白藜蘆醇對(duì)牛體外發(fā)育囊胚總細(xì)胞數(shù)的影響
        2.2.3 白藜蘆醇對(duì)牛體外發(fā)育 PA 和 IVF 囊胚凋亡的影響
        2.2.4 白藜蘆醇對(duì)牛體外發(fā)育 PA 和 IVF 胚胎細(xì)胞內(nèi) ROS 的影響
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 限定培養(yǎng)液培養(yǎng)效果的研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 試劑耗材與配方
        3.1.4 卵母細(xì)胞的采集及體外成熟培養(yǎng)
        3.1.5 孤雌激活
        3.1.6 囊胚差異染色及細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.1.7 囊胚凋亡染色
        3.1.8 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 不同培養(yǎng)液對(duì)牛孤雌激活胚胎體外發(fā)育率的影響
        3.2.2 不同培養(yǎng)液對(duì)牛體外發(fā)育囊胚總細(xì)胞數(shù)的影響
        3.2.3 不同培養(yǎng)液對(duì)牛體外發(fā)育囊胚凋亡的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]生長因子EGF、bFGF對(duì)豬孤雌胚體外發(fā)育的影響[J]. 劉吉,潘登科,張莉,牟玉蓮,張勇,楊述林,王子榮,馮書堂.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(01)

博士論文
[1]細(xì)胞內(nèi)ROS水平改變對(duì)細(xì)胞活性及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響[D]. 秦勇.浙江大學(xué) 2012

碩士論文
[1]不同培養(yǎng)基對(duì)牛轉(zhuǎn)基因克隆胚發(fā)育及印跡基因Igf2甲基化狀況的影響[D]. 蘇建民.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2009
[2]BCB染色法篩選牛卵母細(xì)胞的初探[D]. 曹澤磊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2009
[3]牛體外受精技術(shù)體系的優(yōu)化研究[D]. 胡林勇.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008



本文編號(hào)：2978680