發(fā)布時(shí)間：2021-01-14 15:42

　　日本腦炎（Japanese encephalitis, JE）又稱流行性乙腦腦炎,簡(jiǎn)稱乙腦,是由日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）感染所引發(fā)的一種人畜共患病。JEV屬于黃病毒科黃病毒屬,在自然條件下主要通過(guò)蚊蟲(chóng)傳播。豬被認(rèn)為是JEV最重要的自然增殖動(dòng)物,在乙腦的傳播中起到重要作用。豬乙型腦炎病毒存在于東南亞地區(qū)并在大多數(shù)豬場(chǎng)流行,嚴(yán)重威脅人畜健康。2’-5’寡腺苷合成酶（2’-5’ oligoadenylate synthetases,OAS）是干擾素（Interferon，IFN）誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗病毒蛋白,是哺乳動(dòng)物先天性免疫系統(tǒng)的重要成分。細(xì)胞內(nèi)的OAS/RNaseL信號(hào)通路在宿主控制黃病毒、呼腸孤病毒和腦心肌炎病毒的先天性免疫反應(yīng)中起重要作用。近年來(lái)已有研究證實(shí)OAS存在不依賴于RNase L途徑的抗病毒作用。自發(fā)現(xiàn)小鼠mOAS1b基因?yàn)閃NV的風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志基因以來(lái),已報(bào)道OAS具有抑制腦心肌炎病毒（EMCV）、水皰性口炎病毒（VSV）等多種病毒增殖的作用。人的OAS基因已被證實(shí)與西尼羅病毒（WNV）、丙型肝炎病毒（HCV）和SARS冠狀病毒... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：103 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的研究進(jìn)展
        1 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的生物學(xué)特征
            1.1 2'-5'-寡腺苷酸合成酶家族基因組成
            1.2 2'-5'-寡腺苷酸合成酶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
        2 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的活化機(jī)制
        3 2'-5'-寡腺苷酸合成酶家族的起源
        4 2'-5'寡腺苷酸合成酶家族抗病毒的分子機(jī)制研究進(jìn)展
            4.1 依賴于OAS/RNase L途徑的抗病毒作用
            4.2 不依賴于RNase L途徑的抗病毒作用
        5 2'-5'寡腺苷酸系統(tǒng)的生物學(xué)功能
        6 2'-5'寡腺苷酸合成酶家族的單核苷酸多態(tài)性分析
    第二章 日本腦炎病毒及其疫苗的研究進(jìn)展
        1 日本腦炎病毒流行病學(xué)特征
            1.1 生態(tài)學(xué)和流行病學(xué)
            1.2 遺傳和抗原多樣性
            1.3 傳播特征
            1.4 臨診癥狀
        2 日本腦炎病毒的分子生物學(xué)特性
            2.1 基因組結(jié)構(gòu)特征
            2.2 蛋白結(jié)構(gòu)特征及功能
            2.3 乙型腦炎病毒的復(fù)制過(guò)程
        3 日本腦炎病毒疫苗的研究進(jìn)展
            3.1 鼠腦純化滅活疫苗
            3.2 細(xì)胞培養(yǎng)減毒活疫苗
            3.3 細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗
            3.4 基因工程嵌合減毒活疫苗
            3.5 痘病毒載體重組疫苗
            3.6 DNA疫苗
        4 日本腦炎病毒的診斷方法
            4.1 臨床綜合診斷
            4.2 病毒分離與鑒定
            4.3 血清學(xué)診斷
            4.4 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
    參考文獻(xiàn)
第二篇 實(shí)驗(yàn)部分
    第三章 豬源OAS2基因的表達(dá)及抗血清的制備
        摘要
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞株
            1.2 菌種、質(zhì)粒
            1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.4 主要試劑
            1.5 主要儀器
            1.6 引物設(shè)計(jì)與合成
            1.7 主要溶液的配制
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 豬源OAS2基因的擴(kuò)增
            2.2 豬源OAS2原核表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.3 重組豬源OAS2蛋白的表達(dá)
            2.4 豬源OAS2多克隆抗體的制備
            2.5 豬源OAS2多克隆抗體的鑒定
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 豬源OAS2基因的PCR擴(kuò)增
            3.2 重組豬源OAS2原核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
            3.3 重組質(zhì)粒pET-OAS2的表達(dá)及鑒定
            3.4 pOAS2抗血清的鑒定
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第四章 豬源OAS基因家族抗JEV感染的初步研究
        摘要
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞和毒株
            1.2 質(zhì)粒載體
            1.3 主要試劑
            1.4 主要儀器
            1.5 引物設(shè)計(jì)與合成
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 豬源OAS基因家族真核表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.2 去內(nèi)毒素小提pFlag-pOAS1b和pcDNA-pOAS2質(zhì)粒
            2.3 噬斑形成試驗(yàn)測(cè)JEV滴度
            2.4 Real-Time PCR檢測(cè)PK-15細(xì)胞內(nèi)OAS基因家族的表達(dá)量
            2.5 Real-Time PCR檢測(cè)PK-15細(xì)胞中JEV滴度變化量
            2.6 豬源OAS基因家族對(duì)JEV增殖影響的間接免疫熒光試驗(yàn)
            2.7 Western Blot試驗(yàn)檢測(cè)豬源OAS基因家族對(duì)JEV增殖的影響
            2.8 Western Blot試驗(yàn)檢測(cè)PK-15細(xì)胞轉(zhuǎn)染OAS2 siRNA后OAS2蛋白表達(dá)量的變化
            2.9 PK-15細(xì)胞RNAi OAS2對(duì)JEV增殖的影響
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 豬源OAS基因家族真核表達(dá)載體的構(gòu)建
                3.1.1 重組PFlag-pOASlb真核表達(dá)載體的鑒定
                3.1.2 重組pcDNA-pOAS2真核表達(dá)載體的鑒定
            3.2 豬干擾素對(duì)JEV增殖的抑制作用
            3.3 豬干擾素誘導(dǎo)豬源OAS基因家族的表達(dá)
            3.4 豬干擾素和JEV強(qiáng)毒株共同作用PK細(xì)胞OAS表達(dá)量變化特征
            3.5 PK-15細(xì)胞過(guò)表達(dá)pOAS蛋白對(duì)JEV增殖的影響
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第五章 豬源OAS1編碼區(qū)SNP特征
        摘要
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 組織樣品
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 溶液的配置
            1.5 引物設(shè)計(jì)與合成
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 豬基因組DNA的提取
            2.2 豬OAS1編碼區(qū)外顯子的獲得
            2.3 PCR產(chǎn)物的回收純化
            2.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和處理
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果
            3.2 pOAS1a和pOAS1b基因外顯子1-6的比較分析
            3.3 pOAS1a基因編碼區(qū)外顯子的SNP檢測(cè)
            3.4 pOAS1b基因編碼區(qū)外顯子的SNP檢測(cè)
            3.5 健康豬及乙腦發(fā)病豬OAS1編碼區(qū)SNP特征
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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