發(fā)布時間：2021-01-13 19:33

　　為了解牛支原體（Mycoplasma bovis）貴州株表面膜蛋白p81基因的生物信息學(xué)特征,對2株貴州分離株p81基因進(jìn)行克隆測序,應(yīng)用DNAStar 7.1、Mega 5.0、Protparam、Protscale、IEBD等軟件進(jìn)行序列分析。結(jié)果顯示,2株M.bovis貴州分離株培養(yǎng)物DNA樣本均能PCR擴(kuò)增出2 187 bp的特異性條帶,序列編碼728個氨基酸,該分離株與標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)G45進(jìn)化關(guān)系最為接近,說明牛支原體p81基因具有良好的保守性。p81蛋白共存在5個N糖基化位點(diǎn),59個絲氨酸、29個蘇氨酸及11個酪氨酸可能被磷酸化。p81蛋白B細(xì)胞抗原表位分析顯示該蛋白具有良好的抗原性。研究結(jié)果表明,p81蛋白具有作為亞單位疫苗和診斷試劑靶標(biāo)蛋白的優(yōu)勢。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

p81基因片段PCR擴(kuò)增結(jié)果

提取重組質(zhì)粒,用限制性內(nèi)切酶KpnⅠ和SalⅠ對重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定,酶切產(chǎn)物電泳電泳結(jié)果見圖3。重組質(zhì)粒雙酶切可見約2 187 bp的目的基因條帶和2 962 bp的載體條帶,結(jié)果證實(shí),目的基因克隆成功。2.2.3 p81基因推到氨基酸序列分析

經(jīng)PCR和雙酶切鑒定為陽性的重組質(zhì)粒進(jìn)行測序,對氨基酸序列進(jìn)行推導(dǎo)分析。由圖4可見,p81基因序列編碼728個氨基酸,推導(dǎo)氨基酸55 位、230 位、485 位、558位密碼子為TGA,可作為終止密碼子,但對于牛支原體p81基因?yàn)樯彼?如進(jìn)行蛋白表達(dá)需進(jìn)行位點(diǎn)突變。將2株M.bovis貴州株氨基酸序列與參考株P(guān)G45氨基酸序列進(jìn)行比較顯示, 2株分離自貴州省不地區(qū)的M.bovis貴州株氨基酸序列完全相同,但與PG45株p81蛋白氨基酸序列發(fā)生110位點(diǎn)突變。此結(jié)果表明,貴州省內(nèi)M.bovis菌株p81蛋白保守,但相較于標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)G45株已出現(xiàn)明顯進(jìn)化。圖4 牛支原體貴州株p81基因推導(dǎo)的氨基酸序列

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：2975440