乳腺生物反應(yīng)器充分利用動物乳腺組織具有合成和分泌乳汁的功能,目前被廣泛使用于生產(chǎn)功能蛋白等,現(xiàn)已成為極具開發(fā)應(yīng)用前景的生物技術(shù)。乳腺上皮細胞是乳腺組織中特異性具有分泌功能的細胞,在體外分離培養(yǎng)的乳腺上皮細胞同樣擁有與在體內(nèi)組織相似的分泌功能,建立乳腺上皮細胞體外培養(yǎng)系統(tǒng)為研究乳腺組織的泌乳機理、驗證和檢測乳腺特異表達載體功能具有重要意義。本研究對牛乳腺上皮細胞進行分離、培養(yǎng)和鑒定,并用鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的乳腺上皮細胞表達β-酪蛋白。論文的研究內(nèi)容主要包括兩個部分：1.利用泌乳期的奶牛乳腺組織,在體外進行乳腺上皮細胞的分離、純化和鑒定。本研究利用組織塊培養(yǎng)法、酶消化培養(yǎng)法、機械培養(yǎng)法進行分離細胞,利用差速貼壁結(jié)合差速脫壁純化分離的乳腺上皮細胞。對分離細胞的顯微觀察表明,三種方法培養(yǎng)細胞可以獲得成纖維樣細胞和上皮樣細胞混合生長的細胞,培養(yǎng)細胞形態(tài)完整；差速脫壁法和差速貼壁法結(jié)合純化細胞,成纖維樣細胞完全消失,所得細胞全部為為鵝卵石狀或卵圓形的上皮樣細胞。純化的細胞傳代培養(yǎng),細胞進行顯微觀察、生長曲線繪制、核型制備,結(jié)果表明培養(yǎng)的細胞形態(tài)良好、具有正常的上皮細胞形態(tài)、細胞... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 奶牛乳腺上皮細胞的分離鑒定
    引言
    1.1 實驗材料
        1.1.1 主要儀器和設(shè)備等
        1.1.2 主要試劑及耗材
        1.1.3 活體材料的獲取
    1.2 實驗方法
        1.2.1 乳腺細胞的原代培養(yǎng)
        1.2.2 牛乳腺上皮細胞冷凍和解凍培養(yǎng)
        1.2.3 牛乳腺上皮細胞的純化
        1.2.4 牛乳腺上皮細胞的形態(tài)觀察實驗
        1.2.5 牛乳腺上皮細胞生長曲線的繪制
        1.2.6 牛乳腺上皮細胞染色體制備及核型分析
        1.2.7 牛乳腺上皮細胞的免疫熒光鑒定
        1.2.8 PCR檢測β-酪蛋白在mRNA水平的表達
    1.3 實驗結(jié)果
        1.3.1 牛乳腺上皮細胞的原代培養(yǎng)
        1.3.2 牛乳腺上皮細胞純化
        1.3.3 細胞形態(tài)觀察結(jié)果
        1.3.4 牛乳腺上皮細胞的生長曲線
        1.3.5 牛乳腺上皮細胞的染色體制備及核型分析
        1.3.6 牛乳腺上皮細胞的免疫熒光染色
        1.3.7 牛乳腺上皮細胞β-casein表達檢測
    1.4 討論
        1.4.1 牛乳腺上皮細胞的分離培養(yǎng)
        1.4.2 牛乳腺上皮細胞的鑒定
    參考文獻
第二章 鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）對牛乳腺上皮細胞β-casein分泌的影響的研究
    引言
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗所使用的細胞
        2.1.2 實驗儀器設(shè)備
        2.1.3 實驗試劑及耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 牛乳腺上皮細胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)
        2.2.2 DPB對牛乳腺上皮細胞的細胞活性影響分析（MTT法分析）
        2.2.3 流式細胞儀測定牛乳腺上皮細胞活力
        2.2.4 誘導(dǎo)培養(yǎng)的牛乳腺上皮細胞總RNA的提取
        2.2.5 RNA反轉(zhuǎn)錄實驗
        2.2.6 RT-PCR檢測β—酪蛋白在mRNA水平的表達
        2.2.7 統(tǒng)計分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)的乳腺上皮細胞的形態(tài)
        2.3.2 DBP對牛乳腺上皮細胞增殖的影響
        2.3.3 DBP對牛乳腺上皮細胞活力的影響
        2.3.4 DBP對牛乳腺上皮細胞中β-酪蛋白表達量的誘導(dǎo)
    2.4 討論
    參考文獻
文獻綜述
    1 動物生物反應(yīng)器結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)
        1.1 生物反應(yīng)器的種類及發(fā)展
        1.2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其發(fā)展
        1.3 乳腺生物反應(yīng)器
    2 乳腺組織和乳腺生物反應(yīng)器
        2.1 乳腺組織
        2.2 乳腺生物反應(yīng)器的制備過程
        2.3 優(yōu)點
        2.4 不同的轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)生產(chǎn)的外源蛋白的比較
        2.5 乳腺生物反應(yīng)器的藥物生產(chǎn)國外現(xiàn)狀
    3 乳腺上皮細胞
    4 乳腺上皮細胞的誘導(dǎo)
        4.1 乳腺組織的激素調(diào)節(jié)
        4.2 中草藥成分的誘導(dǎo)作用
        4.3 轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控
        4.4 DBP誘導(dǎo)β-酪蛋白作用
    參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2975131