FPV JL09C2株中REV插入?yún)^(qū)基因的表達(dá)驗(yàn)證及單抗制備
發(fā)布時(shí)間：2021-01-09 08:36
雞痘是由雞痘病毒（Fowlpox virus，F(xiàn)PV）引起的一種接觸性傳染病，廣泛發(fā)生于雞和火雞，臨床上主要分為皮膚型、黏膜型和混合型三種。皮膚型雞痘特征性病變表現(xiàn)為局灶性上皮組織增生；黏膜型又稱“白喉型”，以口腔和咽喉黏膜發(fā)生纖維素性壞死性炎癥為主要特征，由于該型病雞常發(fā)生窒息死亡而導(dǎo)致此病變?cè)谂R床上不常見；混合型則兼有以上兩種類型的病理變化。FPV感染可引起母雞產(chǎn)蛋量下降、育肥雞生長(zhǎng)遲緩，甚至出現(xiàn)繼發(fā)感染而導(dǎo)致病雞死亡，因此該病的發(fā)生對(duì)世界養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。近半個(gè)世紀(jì)以來，在雞痘流行區(qū)域，主要使用雞痘和鴿痘病毒疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防，雖然因普遍采用疫苗免疫接種使雞痘疫情報(bào)道明顯減少，但由于病毒變異而導(dǎo)致免疫失敗引發(fā)雞痘的病例時(shí)有發(fā)生。近年來，在我國的FPV疫苗毒和野毒株中不斷有REV的污染和基因整合的報(bào)道，REV基因片段甚至完整的基因組整合在FPV基因組中的現(xiàn)象比較普遍。2009年，本實(shí)驗(yàn)室從吉林省公主嶺市某爆發(fā)雞痘的大型雞場(chǎng)中分離到了一株高致病性雞痘病毒，通過雞胚進(jìn)行克隆純化，并將其命名為FPV JL09C2。對(duì)FPV JL09C2株進(jìn)行全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，其基因組中整合了接近全...
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：66 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
FPV基因組結(jié)構(gòu)
圖1.1 PCR擴(kuò)增FPV ORF 202(1，4)，REV gag(2，5)、gp90(3)、及env(6)的電泳分析;M 為100bp DNA Ladder Marker。 Amplification of FPV ORF 202(1，4)，REV gag(2，5)、gp90(3)and env geneM: 100bp DNA Ladder Marker (bp).V-gag， REV-gp90 蛋白在 E.coli BL21(DE3)中的誘導(dǎo)表達(dá)得 REV-gag， REV-gp90 重組原核表達(dá)蛋白，分別將構(gòu)建好的 pET28a-gag 原核表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)菌 E.coli BL21(DE3)中，表達(dá)重組菌在 37℃0=0.8-1.0 后加入終濃度為 1mM IPTG 誘導(dǎo)表達(dá) 5 小時(shí)后 SDS-PAGE 檢查目的在誘導(dǎo)表達(dá) 5h 后與誘導(dǎo)表達(dá)前相比在蛋白分子量大小 45 和 50KDa 左右的蛋白條帶（圖 1.2）。
圖1.2 SDS-PAG分析蛋白的表達(dá)和純化情況1：誘導(dǎo)前;2：誘導(dǎo)后。B，D為A，C純化后的蛋白; M:蛋白預(yù)Fig. 1.2 SDS-PAG analysis of gene expression1：pre-expression;2：expression; M:protein marker.REV-gp90 表達(dá)情況分析C2 中插入的 REV 序列在 5’ 和 3’ 端 LTR 分別缺失 29 和 320bR 為 REV 的啟動(dòng)子。為了驗(yàn)證兩端缺失的序列是否會(huì)影響 RECD
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同感染量REV對(duì)雞免疫反應(yīng)和細(xì)胞毒性作用的影響[J]. 郭慧君,崔治中,孫淑紅,柳風(fēng)祥. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(09)
[2]用單抗介導(dǎo)的免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)組織切片中的禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒[J]. 張志,王錫樂,莊國慶,崔治中. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(02)
[3]SPF雛雞感染REV后免疫器官免疫功能的動(dòng)態(tài)變化[J]. 李廣興,楊麗萍,楊貴君,劉忠貴. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2000(04)
[4]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病的組織病理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化[J]. 郁曉嵐,徐福南,蔡寶祥,陳溥言. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 1989(02)
[5]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒的分離鑒定[J]. 何宏虎,陳溥言,蔡寶祥. 中國畜禽傳染病. 1988(02)
本文編號(hào)：2966323
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：66 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
FPV基因組結(jié)構(gòu)
圖1.1 PCR擴(kuò)增FPV ORF 202(1，4)，REV gag(2，5)、gp90(3)、及env(6)的電泳分析;M 為100bp DNA Ladder Marker。 Amplification of FPV ORF 202(1，4)，REV gag(2，5)、gp90(3)and env geneM: 100bp DNA Ladder Marker (bp).V-gag， REV-gp90 蛋白在 E.coli BL21(DE3)中的誘導(dǎo)表達(dá)得 REV-gag， REV-gp90 重組原核表達(dá)蛋白，分別將構(gòu)建好的 pET28a-gag 原核表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)菌 E.coli BL21(DE3)中，表達(dá)重組菌在 37℃0=0.8-1.0 后加入終濃度為 1mM IPTG 誘導(dǎo)表達(dá) 5 小時(shí)后 SDS-PAGE 檢查目的在誘導(dǎo)表達(dá) 5h 后與誘導(dǎo)表達(dá)前相比在蛋白分子量大小 45 和 50KDa 左右的蛋白條帶（圖 1.2）。
圖1.2 SDS-PAG分析蛋白的表達(dá)和純化情況1：誘導(dǎo)前;2：誘導(dǎo)后。B，D為A，C純化后的蛋白; M:蛋白預(yù)Fig. 1.2 SDS-PAG analysis of gene expression1：pre-expression;2：expression; M:protein marker.REV-gp90 表達(dá)情況分析C2 中插入的 REV 序列在 5’ 和 3’ 端 LTR 分別缺失 29 和 320bR 為 REV 的啟動(dòng)子。為了驗(yàn)證兩端缺失的序列是否會(huì)影響 RECD
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同感染量REV對(duì)雞免疫反應(yīng)和細(xì)胞毒性作用的影響[J]. 郭慧君,崔治中,孫淑紅,柳風(fēng)祥. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(09)
[2]用單抗介導(dǎo)的免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)組織切片中的禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒[J]. 張志,王錫樂,莊國慶,崔治中. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(02)
[3]SPF雛雞感染REV后免疫器官免疫功能的動(dòng)態(tài)變化[J]. 李廣興,楊麗萍,楊貴君,劉忠貴. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2000(04)
[4]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病的組織病理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化[J]. 郁曉嵐,徐福南,蔡寶祥,陳溥言. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 1989(02)
[5]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒的分離鑒定[J]. 何宏虎,陳溥言,蔡寶祥. 中國畜禽傳染病. 1988(02)
本文編號(hào)：2966323
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