豬流行性腹瀉�。≒ED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的以水樣腹瀉、嘔吐為主要特征的傳染病,該病能夠感染所有年齡段豬只,死亡率居高不下。該病自上世紀70年代發(fā)現(xiàn)以來,就成為養(yǎng)豬業(yè)的一大難題,在短時間內(nèi),給歐洲和亞洲的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失,因此,對PEDV疫苗的開發(fā)變得尤為重要,而生產(chǎn)用種毒的特性研究則是疫苗研發(fā)的基礎(chǔ)。本研究對實驗室分離保存的PEDV-SC-P毒株在非洲綠猴傳代腎細胞（Vero）上進行了傳代增殖培養(yǎng),按照《中國獸藥典》（2010版）和《中華人民共和國獸用生物制品質(zhì)量標準》（2001版）要求,對生產(chǎn)用Vero細胞進行純凈性檢驗,對PEDV-SC-P毒株的增殖特性、遺傳穩(wěn)定性、理化特性、純凈性、安全性、免疫原性、特異性和種毒最佳保存條件等進行了檢測和研究,從而評估其作為疫苗種毒的開發(fā)前景和價值。通過純凈性檢驗得出,生產(chǎn)用Vero細胞和PEDV種毒均純凈性高,無細菌、霉菌、支原體和外源病毒污染；增殖特性和遺傳穩(wěn)定性研究表明,PEDV種毒在Vero細胞上連續(xù)傳代40次,均有穩(wěn)定細胞病變出現(xiàn)（CPE）,病毒在細胞質(zhì)中進行增殖,在接毒36h后病毒含量達到高峰,且毒力穩(wěn)定,遺... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞
1 文獻綜述
    1.1 PEDV的發(fā)現(xiàn)
    1.2 PEDV病原學特征
        1.2.1 PEDV形態(tài)和理化特征
        1.2.2 PEDV血清型
        1.2.3 PEDV細胞培養(yǎng)特性
        1.2.4 PEDV致病機理
    1.3 PEDV的流行病學特點
    1.4 PEDV的基因結(jié)構(gòu)
    1.5 PEDV的實驗室診斷技術(shù)
    1.6 PEDV的疫苗發(fā)展
    1.7 研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 毒種與細胞
        2.1.3 實驗動物
        2.1.4 引物設計
        2.1.5 所用試劑的配制
        2.1.6 主要設備儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 建立細胞庫
        2.2.2 Vero細胞的純凈性檢測
        2.2.3 PEDV的增殖培養(yǎng)及病變觀察
        2.2.4 PEDV種毒的一步生長曲線測定
        2.2.5 PEDV種毒的遺傳穩(wěn)定性檢驗
        2.2.6 PEDV種毒的鑒定
        2.2.7 種毒的理化特性研究
        2.2.8 PEDV-SC-P毒株的檢驗
        2.2.9 建立種子批
3 結(jié)果
    3.1 VERO細胞的培養(yǎng)結(jié)果
    3.2 VERO細胞的純凈性檢測結(jié)果
        3.2.1 Vero細胞的無菌檢測結(jié)果
        3.2.2 Vero細胞的支原體檢測結(jié)果
    3.3 PEDV的增殖培養(yǎng)及病變觀察結(jié)果
    3.4 PEDV種毒一步生長曲線的測定結(jié)果
    3.5 PEDV種毒的遺傳穩(wěn)定性檢驗結(jié)果
    3.6 PEDV種毒的鑒定結(jié)果
        3.6.1 免疫熒光的鑒定結(jié)果
        3.6.2 RT-PCR的鑒定結(jié)果
    3.7 PEDV的理化特性研究結(jié)果
        3.7.1 種毒核酸類型鑒定結(jié)果
        3.7.2 種毒酯溶劑敏感試驗結(jié)果
        3.7.3 種毒PH穩(wěn)定性試驗結(jié)果
        3.7.4 種毒熱穩(wěn)定性試驗結(jié)果
    3.8 PEDV-SC-P毒株的檢驗結(jié)果
        3.8.1 病毒含量的檢測結(jié)果
        3.8.2 種毒的純凈性檢測
        3.8.3 種毒的外源病毒檢測結(jié)果
        3.8.4 種毒的安全性檢測結(jié)果
        3.8.5 種毒的免疫原性檢測結(jié)果
        3.8.6 種毒的特異性檢測結(jié)果
    3.9 PEDV種毒保存條件及時間試驗結(jié)果
4 討論
    4.1 關(guān)于PEDV疫苗
    4.2 關(guān)于PEDV種毒的增殖
    4.3 關(guān)于PEDV種毒的理化特性
    4.4 關(guān)于PEDV-SC-P株的檢驗
    4.5 關(guān)于種毒保存的條件及時間
5 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：2964007