豬流行性腹瀉�。≒ED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的以水樣腹瀉、嘔吐為主要特征的傳染病,該病能夠感染所有年齡段豬只,死亡率居高不下。該病自上世紀(jì)70年代發(fā)現(xiàn)以來,就成為養(yǎng)豬業(yè)的一大難題,在短時(shí)間內(nèi),給歐洲和亞洲的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失,因此,對(duì)PEDV疫苗的開發(fā)變得尤為重要,而生產(chǎn)用種毒的特性研究則是疫苗研發(fā)的基礎(chǔ)。本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離保存的PEDV-SC-P毒株在非洲綠猴傳代腎細(xì)胞（Vero）上進(jìn)行了傳代增殖培養(yǎng),按照《中國(guó)獸藥典》（2010版）和《中華人民共和國(guó)獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2001版）要求,對(duì)生產(chǎn)用Vero細(xì)胞進(jìn)行純凈性檢驗(yàn),對(duì)PEDV-SC-P毒株的增殖特性、遺傳穩(wěn)定性、理化特性、純凈性、安全性、免疫原性、特異性和種毒最佳保存條件等進(jìn)行了檢測(cè)和研究,從而評(píng)估其作為疫苗種毒的開發(fā)前景和價(jià)值。通過純凈性檢驗(yàn)得出,生產(chǎn)用Vero細(xì)胞和PEDV種毒均純凈性高,無細(xì)菌、霉菌、支原體和外源病毒污染；增殖特性和遺傳穩(wěn)定性研究表明,PEDV種毒在Vero細(xì)胞上連續(xù)傳代40次,均有穩(wěn)定細(xì)胞病變出現(xiàn)（CPE）,病毒在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行增殖,在接毒36h后病毒含量達(dá)到高峰,且毒力穩(wěn)定,遺... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 PEDV的發(fā)現(xiàn)
    1.2 PEDV病原學(xué)特征
        1.2.1 PEDV形態(tài)和理化特征
        1.2.2 PEDV血清型
        1.2.3 PEDV細(xì)胞培養(yǎng)特性
        1.2.4 PEDV致病機(jī)理
    1.3 PEDV的流行病學(xué)特點(diǎn)
    1.4 PEDV的基因結(jié)構(gòu)
    1.5 PEDV的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)
    1.6 PEDV的疫苗發(fā)展
    1.7 研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 毒種與細(xì)胞
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 引物設(shè)計(jì)
        2.1.5 所用試劑的配制
        2.1.6 主要設(shè)備儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 建立細(xì)胞庫(kù)
        2.2.2 Vero細(xì)胞的純凈性檢測(cè)
        2.2.3 PEDV的增殖培養(yǎng)及病變觀察
        2.2.4 PEDV種毒的一步生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        2.2.5 PEDV種毒的遺傳穩(wěn)定性檢驗(yàn)
        2.2.6 PEDV種毒的鑒定
        2.2.7 種毒的理化特性研究
        2.2.8 PEDV-SC-P毒株的檢驗(yàn)
        2.2.9 建立種子批
3 結(jié)果
    3.1 VERO細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果
    3.2 VERO細(xì)胞的純凈性檢測(cè)結(jié)果
        3.2.1 Vero細(xì)胞的無菌檢測(cè)結(jié)果
        3.2.2 Vero細(xì)胞的支原體檢測(cè)結(jié)果
    3.3 PEDV的增殖培養(yǎng)及病變觀察結(jié)果
    3.4 PEDV種毒一步生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果
    3.5 PEDV種毒的遺傳穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果
    3.6 PEDV種毒的鑒定結(jié)果
        3.6.1 免疫熒光的鑒定結(jié)果
        3.6.2 RT-PCR的鑒定結(jié)果
    3.7 PEDV的理化特性研究結(jié)果
        3.7.1 種毒核酸類型鑒定結(jié)果
        3.7.2 種毒酯溶劑敏感試驗(yàn)結(jié)果
        3.7.3 種毒PH穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
        3.7.4 種毒熱穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
    3.8 PEDV-SC-P毒株的檢驗(yàn)結(jié)果
        3.8.1 病毒含量的檢測(cè)結(jié)果
        3.8.2 種毒的純凈性檢測(cè)
        3.8.3 種毒的外源病毒檢測(cè)結(jié)果
        3.8.4 種毒的安全性檢測(cè)結(jié)果
        3.8.5 種毒的免疫原性檢測(cè)結(jié)果
        3.8.6 種毒的特異性檢測(cè)結(jié)果
    3.9 PEDV種毒保存條件及時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果
4 討論
    4.1 關(guān)于PEDV疫苗
    4.2 關(guān)于PEDV種毒的增殖
    4.3 關(guān)于PEDV種毒的理化特性
    4.4 關(guān)于PEDV-SC-P株的檢驗(yàn)
    4.5 關(guān)于種毒保存的條件及時(shí)間
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：2964007