褪黑素是一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，對哺乳動物的生殖生理有調(diào)控作用，而這種作用是由褪黑素受體MT1和MT2介導(dǎo)的。褪黑素可直接作用于卵巢上分布的褪黑素受體，調(diào)控卵巢卵泡的發(fā)育。白牦牛是生活在高寒缺氧嚴峻自然條件下的稀有牦牛品種，褪黑素受體在白牦牛卵巢中的分布特征，褪黑素受體基因在白牦牛卵巢內(nèi)的表達模式以及褪黑素調(diào)控白牦牛卵巢的生殖機理至今我們還尚未弄清。所以，此研究選擇了雌性的白牦牛為研究對象，運用分子生物學、免疫組化、熒光定量的方法，對白牦牛卵巢中褪黑素受體分布和表達做了初步的研究，其結(jié)果是如下：1.分子特征成功克隆了白牦牛卵巢褪黑素受體MT1（843bp）和MT2（411bp）基因序列，同源比對發(fā)現(xiàn)白牦牛和水牛的MT1基因序列最接近為95.6%；MT2基因序列與黃牛的最相似，預(yù)測和比對分析了白牦牛褪黑素受體基因所編碼的蛋白肽段，發(fā)現(xiàn)了白牦牛MT1和MT2受體蛋白均屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，且白牦牛的MT1和MT2基因均未見有人報道過。2.受體分布免疫組織化學的結(jié)果顯示，MT1和MT2受體在白牦牛的卵巢中表達位置及表達量存在差異性，其表達量均較高，說明褪黑素在調(diào)節(jié)卵巢發(fā)揮生理作用過程中，MT1... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Summary
目錄
第一篇 文獻綜述 褪黑素與哺乳動物生殖的研究進展
    1.褪黑素的生理功能及初步研究
    2.褪黑素受體的分類及相關(guān)進展
    3. 褪黑素受體基因序列的克隆和分子特性
    4 褪黑素和褪黑素受體與動物繁殖的關(guān)系
        4.1 褪黑素受體的分布
        4.2 褪黑素在卵巢中的表達
第二篇 實驗研究
    1.材料和方法
        1.1 實驗材料
        1.2 試驗方法
            1.2.1 樣品的采集
            1.2.2 總RNA提取
            1.2.3 RT-PCR擴增目的片段
            1.2.4 目的基因的載體連接、克隆及測序
            1.2.5 實驗組織樣品的制備及其顯色
            1.2.6 統(tǒng)計學分析
            1.2.7 Total RNA 提取及濃度測定
            1.2.8 RT 反應(yīng)
            1.2.9 實時熒光定量 PCR 反應(yīng)
    2.結(jié)果
        2.1 總 RNA 的提取
        2.2 RT-PCR
        2.3 克隆質(zhì)粒的 PCR 鑒定
        2.4 克隆質(zhì)粒的測序
1序列核苷酸以及預(yù)測氨基酸序列分析">            2.4.1 MT₁序列核苷酸以及預(yù)測氨基酸序列分析
2序列核苷酸以及預(yù)測氨基酸序列分析">            2.4.2 MT₂序列核苷酸以及預(yù)測氨基酸序列分析
        2.5 卵巢中褪黑素受體的表達
        2.6 目的基因的熒光定量檢測
    3.討論
        3.1 總 RNA 提取及RT反應(yīng)
        3.2 褪黑素受體的 cDNA 克隆、測序和分析
        3.3 關(guān)于褪黑素受體在白牦牛卵巢中的定位
1，MT₂和 LHR mRNA 在卵巢中的差異表達">        3.4 MT₁，MT₂和 LHR mRNA 在卵巢中的差異表達
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]多胎與單胎山羊發(fā)情期卵巢褪黑素受體基因的差異表達研究[J]. 汪運舟,曾啟繁,陳維云,王慧,王樹迎.  中國農(nóng)學通報. 2011(03)
[2]處理方式不同的顆粒細胞和卵泡液對牛卵母細胞體外受精后卵裂率和囊胚率的影響[J]. 鄧雯,禹學禮,龐有志,昝林森.  分子細胞生物學報. 2008(05)
[3]卵泡顆粒細胞維持山羊卵母細胞減數(shù)分裂抑制狀態(tài)的研究[J]. 劉利杰,權(quán)富生,劉軍,張東,劉根勝,張涌.  華北農(nóng)學報. 2008(04)
[4]褪黑素埋植對非繁殖季節(jié)綿羊發(fā)情和血漿中激素的影響[J]. 張海容,李發(fā)弟,張勇.  中國草食動物. 2006(04)
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本文編號：2963122