近年來,禽白血病病毒J亞群（ALV-J）在全球范圍內(nèi)的爆發(fā)引發(fā)了大規(guī)模的禽類死亡,給禽類的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展帶來巨大的經(jīng)濟損失。目前,還沒有針對ALV-J的有效疫苗和治療藥物,因此,尋找簡單、高效且靈敏度高的方法檢測ALV-J變得至關(guān)重要。免疫傳感分析是將免疫檢測與合適的傳感器相結(jié)合的一種檢測技術(shù),具有靈敏度高、響應(yīng)速度快、簡單易操作等優(yōu)點,為禽白血病病毒的檢測提供了有效的檢測手段。在免疫傳感器的構(gòu)建中,使用具有生物相容性好、比表面積大等特點的優(yōu)異納米材料,提高信號分子的負載量,是實現(xiàn)信號擴增和提高信號檢測靈敏度的關(guān)鍵問題。錳是自然界中廣泛存在的一種元素,自被發(fā)現(xiàn)以來,錳及其化合物被人們廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)生活等各方面。本文以錳類納米材料為基礎(chǔ),研究了中空二氧化錳、三維花簇狀二氧化錳、球狀碳酸錳等納米材料的性質(zhì),并以這些材料制備信號探針或載體,構(gòu)建了三種夾心型免疫傳感器,研究了其對傳感器檢測信號擴增的作用,并實現(xiàn)了對禽白血病病毒的靈敏檢測。本文主要分為以下三個部分:（1）基于中空二氧化錳（H-MnO₂）納米復(fù)合材料制備夾心型電化學免疫傳感器檢測禽白血病病毒。以單寧還原氧化石墨烯... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SnS2QDs/S2O82-/AgNFs系統(tǒng)可能的ECL機制(Leietal.,2018b)

?電極表面的固定，而利用納米材料作為信號載體能夠有效增加信號分子的負載量，從而實現(xiàn)信號擴增，提高檢測的靈敏度。Zhang等人采用逐層法將Ru(bpy)32+和二氧化硅納米顆粒固定在一起，制備了ECL信號更靈敏的免疫傳感器(Zhangetal.,2006)。Dai等人(Daietal.,2019)構(gòu)建了一種基于Pd/NH2-ZIF-67納米復(fù)合材料的夾心型電化學免疫傳感器，用于PSA檢測，構(gòu)建過程如圖2所示。以NH2-ZIF-67納米材料作載體增加了信號分子PdNPs的負載量，實現(xiàn)了信號放大。相較于一般的傳感器，納米材料的出現(xiàn)為免疫檢測的信號放大提供了更多可能。圖2.基于Pd/NH2-ZIF-67納米復(fù)合材料的夾心型電化學免疫傳感器的構(gòu)建過程示意圖(Daietal.,2019)Figure2theschematicdiagramofthefabricationprocessofthesandwichelectrochemicalimmunosensorbasedonPd/NH2-ZIF-67nanocomposite(Daietal.,2019)1.5納米材料的選擇納米材料是指由至少一個維度為1到100納米的粒子組成的材料，其特性與相同體積的材料有顯著的不同(Olssonetal.,2010)。基于維數(shù)進行分類，納米材料主要包括：零維(0D)的球體、粒子、量子點(QDs)等；一維(1D)的有針狀納米棒、納米纖維和納米線等；二維(2D)納米復(fù)合材料通常具有片狀結(jié)構(gòu)，包括納米膜、納米膜和納米涂層；在具有三維(3D)結(jié)構(gòu)的納米材料中，其三個維度都超過了100nm(Chenetal.,2018;Wangetal.,2018a;Zhangetal.,2014)。納米材料，包括納米金、納米銀、納米鈀、半導(dǎo)體納米顆粒、

基于錳類納米材料信號擴增免疫傳感器檢測禽白血病病毒的研究14然后加入50μLAb2，在4℃環(huán)境下孵化24小時后，離心收集，重新分散至1mL的PBS溶液中，放入4℃的冰箱中備用。2.2.1.5單寧還原氧化石墨烯的制備將20mg氧化石墨烯超聲分散到10mL二次水中，加入單寧(400wt%)后再超聲反應(yīng)1小時。在80℃的油浴鍋中反應(yīng)10小時，冷卻后過濾，二次水洗兩次，得到GR-TA。2.2.1.6電化學免疫傳感器的構(gòu)建圖3Ab2-MnO2-Cu-PEI探針的制備(A)；GR-TA納米復(fù)合材料的制備(B)；免疫傳感器的構(gòu)建示意圖(C)Fig.3ThepreparationofAb2-MnO2-Cu-PEIbioconjugates(A)andGR-TA；Schematicdiagramofthestepwiseimmunosensorfabricationprocess(C)電化學免疫傳感器的構(gòu)建如示意圖3所示。第一步，將干凈的玻碳電極用粒徑為0.3μm和0.05μm的Al2O3漿拋光，在乙醇中超聲10min，二次水清洗，吹干備用。第二步，移取5μL石墨烯-單寧復(fù)合物，滴加至處理好的GCE電極表面，置于紅外燈光下烤干。冷卻至室溫，得到的修飾電極標記為GCE/GR-TA。第三步，二次水沖洗電極表面，然后在GCE/GR-TA表面滴加5μL一抗(Ab1)，室溫環(huán)境下放置2h，使Ab1吸附到GR-TA表面，用無菌0.01MPBS(pH=7.4)緩沖溶液沖洗電極表面，記為GCE/GR-TA/Ab1。第四步：滴加5μL質(zhì)量濃度0.1%的BSA于GR-TA/Ab1電極表面，并且在濕潤條件下孵化1h左右以封閉非特異性結(jié)合位點，然后用無菌0.01MPBS緩沖液沖洗電極表面，記作GCE/GR-TA/Ab1-BSA。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2962949