日本血吸蟲病是一種危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病。除了人以外，還有40多種家畜以及野生動(dòng)物是日本血吸蟲的儲(chǔ)存宿主。目前，對血吸蟲病的防控主要基于藥物治療受感染的人和家畜，然而，由于重復(fù)感染嚴(yán)重，單靠藥物治療并不能阻斷血吸蟲病傳播。因此，血吸蟲病疫苗研究是目前防控血吸蟲病的重要科技需求。日本血吸蟲的體被是其與宿主相互作用的主要界面，對日本血吸蟲的生長發(fā)育具有重要的作用，分布于體被上的表膜蛋白是研發(fā)疫苗和藥物的理想靶標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)室前期應(yīng)用蛋白組學(xué)技術(shù)系統(tǒng)分析了不同發(fā)育時(shí)期日本血吸蟲體被表膜蛋白，發(fā)現(xiàn)ferlin蛋白家族中的dysferlin及myoferlin蛋白存在于日本血吸蟲的多個(gè)發(fā)育時(shí)期，推測它在血吸蟲寄生生活中可能起著重要作用。為探討這兩個(gè)基因的序列特征和表達(dá)特性，評估其作為疫苗候選分子的潛力，本文開展了以下研究。1.日本血吸蟲表膜蛋白myoferlin（SjMF）的初步研究利用PCR技術(shù)首次擴(kuò)增日本血吸蟲SjMF基因，獲得了963bp的cDNA序列，構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a（+）-SjMF，并在大腸桿菌中成功表達(dá)，重組蛋白rSjMF分子量約62kDa。實(shí)時(shí)定量PCR分析顯示Sj... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 血吸蟲病防治
        1.2.1 血吸蟲病綜合防治
        1.2.2 血吸蟲病的藥物治療
        1.2.3 血吸蟲病的疫苗研究
    1.3 日本血吸蟲的體被及體被蛋白
        1.3.1 體被結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.2 重要的體被蛋白
        1.3.3 質(zhì)膜修復(fù)機(jī)制的研究
第二章 日本血吸蟲表膜蛋白 SjMF 的初步研究
    2.1 引言
    2.2 試驗(yàn)材料
        2.2.1 生物材料
        2.2.2 主要儀器設(shè)備
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 試劑配制
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 日本血吸蟲蟲體收集
        2.3.2 日本血吸蟲 cDNA 制備
        2.3.3 日本血吸蟲 SjMF 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        2.3.4 目的基因序列保守性分析
        2.3.5 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR 分析 SjMF 在不同期別蟲體中的轉(zhuǎn)錄水平差異
        2.3.6 重組質(zhì)粒 pET-32a（+）-SjMF 的構(gòu)建與鑒定
        2.3.7 重組蛋白 rSjMF 的制備
        2.3.8 Western-blot 檢測重組蛋白的抗原性
        2.3.9 SjMF 蛋白的組織定位
        2.3.10 重組蛋白 rSjMF 免疫保護(hù)效果評估
        2.3.11 重組蛋白 rSjMF 誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分析
        2.3.12 不同劑量吡喹酮對 SjMF 基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.3.13 RNAi 體外抑制日本血吸蟲 SjMF 基因
        2.3.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 試驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 日本血吸蟲 SjMF 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        2.4.2 目的基因序列保守性分析
        2.4.3 實(shí)時(shí)定量 PCR 分析 SjMF 在不同期別蟲體中的轉(zhuǎn)錄水平差異
        2.4.4 重組質(zhì)粒 pET-32a（+）-SjMF 的構(gòu)建與鑒定
        2.4.5 重組蛋白 rSjMF 的表達(dá)及純化
        2.4.6 Western-blot 檢測重組蛋白的免疫原性
        2.4.7 SjMF 蛋白的組織定位
        2.4.8 重組蛋白 rSjMF 免疫保護(hù)效果評估
        2.4.9 重組蛋白 rSjMF 誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分析
        2.4.10 不同劑量吡喹酮對 SjMF 基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.4.11 RNAi 體外抑制日本血吸蟲 SjMF 基因
    2.5 討論
第三章 日本血吸蟲表膜蛋白 SjDF 的初步研究
    3.1 引言
    3.2 試驗(yàn)材料
        3.2.1 生物材料
        3.2.2 主要儀器設(shè)備
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 主要試劑及其配制
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 日本血吸蟲 SjDF 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        3.3.2 目的基因序列保守性分析
        3.3.3 實(shí)時(shí)定量 PCR 分析 SjDF 在不同期別蟲體中的轉(zhuǎn)錄水平差異
        3.3.4 重組質(zhì)粒 pET-28a（+）-SjDF 的構(gòu)建與鑒定
        3.3.5 重組蛋白 rSjDF 的制備
        3.3.6 Western-blot 檢測重組蛋白的抗原性
        3.3.7 SjDF 蛋白的組織定位
        3.3.8 重組蛋白 rSjDF 誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分析
        3.3.9 不同劑量吡喹酮對 SjDF 基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 試驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 日本血吸蟲 SjDF 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        3.4.2 目的基因序列保守性分析
        3.4.3 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR 分析 SjDF 在不同期別蟲體中的轉(zhuǎn)錄水平差異
        3.4.4 重組質(zhì)粒 pET-28a（+）-SjDF 的構(gòu)建與鑒定
        3.4.5 重組蛋白 rSjDF 的表達(dá)及純化
        3.4.6 Western-blot 檢測重組蛋白的免疫原性
        3.4.7 SjDF 蛋白的組織定位
        3.4.8 重組蛋白 rSjDF 誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分析
        3.4.9 不同劑量吡喹酮對 SjDF 基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
    3.5 討論
第四章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]日本血吸蟲體表蛋白rSj29的保護(hù)性效果[J]. 陳虹,傅志強(qiáng),陳雷,邱春輝,付光偉,李曄,邵東華,馮新港,林矯矯.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2009(06)
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[3]Dysferlin在子癇前期胎盤中的表達(dá)[J]. 黃小玲,王自能.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2009(11)
[4]青蒿素類藥物的藥理作用研究進(jìn)展[J]. 譚濤,秦宗會(huì),譚蓉.  中國藥業(yè). 2009(03)
[5]分子克隆實(shí)驗(yàn)指南精編版[J]. 黃培堂.  生物技術(shù)通訊. 2008(06)
[6]吡喹酮處理日本血吸蟲成蟲蛋白質(zhì)組學(xué)分析[J]. 張玲,劉峰,崔書健,徐斌,周曉農(nóng),胡薇.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2008(04)
[7]血吸蟲病免疫病理研究進(jìn)展[J]. 馬鐵軍,王坤平,頓國棟,張錫林.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2008(05)
[8]我國血吸蟲病現(xiàn)狀及治療藥物[J]. 李巖,周藝.  畜牧獸醫(yī)雜志. 2007(01)
[9]日本血吸蟲病疫苗研究進(jìn)展[J]. 辛?xí)苑?朱蔭昌,王國治.  中國血吸蟲病防治雜志. 2006(05)
[10]一種新型日本血吸蟲疫苗(童蟲活細(xì)胞)誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生有效保護(hù)性免疫力的研究[J]. 曾慶仁,林雪遲,龔燕飛,沈杰,張祖萍,蔡力汀,言敢威.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2004(14)

博士論文
[1]日本血吸蟲多表位疫苗構(gòu)建探索和TSP-2抗原鑒定[D]. 蔡鵬飛.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2008

碩士論文
[1]日本血吸蟲體被表膜蛋白分析及表膜蛋白SjNPP-5的初步研究[D]. 張旻.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[2]日本血吸蟲硫氧還蛋白谷胱甘肽還原酶（SjTGR）的克隆、表達(dá)及免疫保護(hù)效果的初步評估[D]. 韓艷輝.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[3]Dysferlin等蛋白在前列腺癌中表達(dá)及意義的研究[D]. 王藝昧.吉林大學(xué) 2008



本文編號：2960532