牛結(jié)核病（Bovine tuberculosis）是由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起的一種慢性傳染性人獸共患病，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必報傳染病，我國將其列為二類動物疫病。我國是全球第二大結(jié)核病高負擔(dān)國家，卡介苗（BCG）是目前唯一可用的疫苗，但是無法區(qū)別是自然感染還是人工免疫，因此研發(fā)牛結(jié)核病的新型疫苗已成為控制牛結(jié)核病的迫切需求。HBHA和HSP65是結(jié)核分枝桿菌的主要黏附素。本文主要研究內(nèi)容：（1）黏附素HBHA、HSP65（Cpn60.2）的串聯(lián)表達。PCR擴增HSP65和HBHA基因，大小分別約為1600bp和600bp，采用SOE技術(shù)串聯(lián)HBHA-HSP65，經(jīng)測序鑒定，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-HSP65、pET-HBHA和pET-HBHA-HSP65，轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3），IPTG誘導(dǎo)表達，經(jīng)SDS-PAGE分析，表達蛋白的分子量分別為65ku、28ku、95ku，主要以可溶狀態(tài)表達。經(jīng)過提純后蛋白濃度分別為2.32mg/mL，1.98mg/mL，2.14mg/mL。經(jīng)Western-blot分析，均能夠被牛結(jié)核病陽性血清... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因的PCR擴增產(chǎn)物Fig.l-1PCRproductoftargetgene7)T.5(1iV(37)NA.marker7-HSPF.S-3NRHA-4-HRHA-HSP55

202.3 目的基因的序列測定分析經(jīng)酶切分析和 PCR 鑒定的重組質(zhì)粒送至上海生工公司進行測序。測序結(jié)果表明，HSP65、HBHA 和融合基因 HBHA-HSP65 的基因序列測定結(jié)果經(jīng)過 DNASTAR 軟件比對，未發(fā)現(xiàn)融合基因發(fā)生點突變；重組基因片段測序也與目的序列完全一致。

202.3 目的基因的序列測定分析經(jīng)酶切分析和 PCR 鑒定的重組質(zhì)粒送至上海生工公司進行測序。測序結(jié)果表明，HSP65、HBHA 和融合基因 HBHA-HSP65 的基因序列測定結(jié)果經(jīng)過 DNASTAR 軟件比對，未發(fā)現(xiàn)融合基因發(fā)生點突變；重組基因片段測序也與目的序列完全一致。

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]人獸共患病專題講座 人獸共患病的現(xiàn)狀與防制（三）——動物結(jié)核病[J]. 金鑫,蘇敬良.  動物保健. 2004(06)
[4]結(jié)核分枝桿菌DNA疫苗研究進展[J]. 王寶林,王洪海.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2004(11)
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本文編號：2958831