腸出血性大腸桿菌能引起人的出血性腹瀉和腸炎，以O(shè)157:H7血清型為代表菌株。為了解新疆三個(gè)地區(qū)不同牛場(chǎng)大腸桿菌O157:H7的流行情況，對(duì)新疆伊犁、塔城、阿克蘇三個(gè)地區(qū)牛場(chǎng)采集的糞樣進(jìn)行大腸桿菌O157:H7的分離鑒定。樣品經(jīng)大腸桿菌肉湯培養(yǎng)基增菌、免疫磁珠富集后，用山梨醇麥康凱平板和4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選，選用菌體O抗原基因和鞭毛H抗原基因?qū)Y選后疑似大腸桿菌O157:H7菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時(shí)結(jié)合生化方法進(jìn)行符合性試驗(yàn)。最終從新疆三個(gè)地區(qū)不同牛場(chǎng)的319份糞便樣品中分離到10株腸出血性大腸桿菌O157:H7，檢出率為3.13％。本研究結(jié)果表明，部分被檢牛場(chǎng)存在被大腸桿菌O157:H7威脅的可能性。本研究以大腸桿菌O157:H7的O抗原基因、鞭毛H抗原基因、黏附素基因和志賀樣毒素為特異基因片段為擴(kuò)增對(duì)象，目的片段選取片段大小不同的5對(duì)引物，通過(guò)反復(fù)摸索反應(yīng)溫度，時(shí)間等一系列反應(yīng)參數(shù)后，確定了最佳反應(yīng)體系。本試驗(yàn)用多重PCR方法檢測(cè)大腸桿菌O157:H7是可行的。通過(guò)對(duì)感染大腸桿菌O157:H7志賀樣毒素小鼠臨床反應(yīng)、致死率、血液生化指標(biāo)的觀察及檢測(cè)，初步分析該病... 

【文章來(lái)源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

E.coliO157:H7菌落形態(tài)

擴(kuò)增后的 PCR 產(chǎn)物用 1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，凝膠成像分析系統(tǒng)觀察結(jié)果。2.1.6.5 生化鑒定根據(jù) E. coli O157:H7 的生理生化特性，對(duì)于 PCR 鑒定 rfbe 基因擴(kuò)增出 500 bp 條帶fliC 基因擴(kuò)增出 625 bp 條帶的菌株用腸桿菌科細(xì)菌生化編碼鑒定管進(jìn)行鑒定，驗(yàn)證 PC檢測(cè)結(jié)果。2.2 試驗(yàn)結(jié)果2.2.1 SMAC 平板選擇性培養(yǎng)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn) E. coli O157:H7 在 SMAC 平板上的形態(tài)為圓形、光滑、較小的無(wú)色菌落（圖2-1）；標(biāo)準(zhǔn) E. coli 在 SMAC 平板上菌落形態(tài)為紅色菌落。通過(guò)細(xì)菌在 SMAC 上的菌落形態(tài)初步篩選出疑似 E. coli O157:H7 菌株。

2-1）；標(biāo)準(zhǔn) E. coli 在 SMAC 平板上菌落形態(tài)為紅色菌落。通過(guò)細(xì)菌在 SMAC 上的菌落形態(tài)初步篩選出疑似 E. coli O157:H7 菌株。圖2-1 E. coli O157:H7菌落形態(tài) 圖2-2 E. coli菌落形態(tài) 圖2-3 分離菌株SMAC檢測(cè)板2.2.2 MUG 試驗(yàn)結(jié)果97﹪ E. coli 含有葡萄糖醛酸苷酶，MUG 作為培養(yǎng)基可被水解，水解后釋放的 4-甲基傘形酮在紫外燈照射下產(chǎn)生藍(lán)白色熒光（圖 2-4）。SMAC 平板篩選出的疑似 E. coliO157:H7 菌株進(jìn)行 MUG 試驗(yàn)后總計(jì) 118 株細(xì)菌不產(chǎn)生藍(lán)白色熒光。

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