產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（Enterotoxigenic E. coli,ETEC）是一種最常見的能夠引起仔豬急性水樣腹瀉和迅速脫水死亡的致病性大腸埃希菌，導(dǎo)致仔豬很高的發(fā)病率和死亡率，這給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來該菌耐藥性不斷上升并呈現(xiàn)較嚴(yán)重的多重耐藥性，其耐藥問題已成為影響人類健康和養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素。對產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的準(zhǔn)確診斷以及監(jiān)控該菌的耐藥狀況，是有效預(yù)防和治療產(chǎn)腸毒素大腸桿菌引發(fā)的仔豬腹瀉的前提。本試驗(yàn)首先建立一個能同時檢測ETEC不耐熱腸毒（Heat-labile enterotoxin，LT），耐熱腸毒素（Heat-stable enterotoxin，STa）和粘附素（fimbriae，F(xiàn)4）等三種毒力因子的多重PCR檢測方法。然后對江西省南昌周邊地區(qū)的豬源大腸桿菌120株分離株進(jìn)行檢測，共檢出79株ETEC陽性菌株，即ETEC的檢出率為65.8%（79/120），其主要毒力基因型是STa和F4的毒力表型。隨機(jī)選取40株ETEC陽性菌株，采用K-B紙片法測定其對20種常用抗菌藥物的敏感性。結(jié)果表明分離株對復(fù)方新諾明（SMZ）、四環(huán)素（TCY）、利福平（RIF）和... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌性仔豬腹瀉主要毒力因子研究進(jìn)展
        1.1 粘附素
        1.2 腸毒素
        1.3 致病機(jī)理
        1.4 ETEC 的檢測
    2 大腸桿菌的耐藥機(jī)制
        2.1 天然性耐藥
        2.2 獲得性耐藥
    3 大腸桿菌多重耐藥性與整合子的研究
        3.1 大腸桿菌多重耐藥耐藥現(xiàn)狀
        3.2 整合子-基因盒系統(tǒng)
        3.3 整合子介導(dǎo)的大腸埃希菌耐藥
        3.4 整合子-基因盒系統(tǒng)的檢測
        3.5 展望
第二部分 試驗(yàn)部分
    試驗(yàn)一 豬產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌多重 PCR 檢測方法的建立
        1 材料
            1.1 參考菌株
            1.2 病料來源
            1.3 主要培養(yǎng)基
            1.4 試劑
            1.5 儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
            2.2 模板的制備
            2.3 PCR 擴(kuò)增
            2.4 PCR 產(chǎn)物的純化
            2.5 目的片段的連接與轉(zhuǎn)化
            2.6 重組質(zhì)粒的鑒定
            2.7 STa、LT 和 F4 單項(xiàng) PCR 條件的優(yōu)化
            2.8 STa、LT 和 F4 多重 PCR 條件的優(yōu)化
        3 結(jié)果
            3.1 單項(xiàng) PCR 退火溫度的確定
            3.2 單項(xiàng) PCR 敏感性的確定
            3.3 單項(xiàng) PCR 引物的特異性檢測
            3.4 三重 PCR 退火溫度的確定
            3.5 三重 PCR 擴(kuò)增的靈敏性
            3.6 三重 PCR 擴(kuò)增的特異性
            3.7 ETEC 標(biāo)準(zhǔn)菌 PCR 產(chǎn)物的測序結(jié)果
            3.8 臨床分離菌株的檢測
        4 小結(jié)與討論
    試驗(yàn)二 江西產(chǎn)腸毒素大腸桿菌分離株的耐藥性檢測和分析
        1 材料
            1.1 菌株與培養(yǎng)基
            1.3 主要試劑
        2 方法
        3 結(jié)果與分析
            3.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果
            3.2 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的耐藥性分析
            3.3 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌多重耐藥分析
            3.4 交叉耐藥分析
        4 小結(jié)與討論
    試驗(yàn)三 整合子-基因盒系統(tǒng)的檢測、定位與分析
        1 材料
            1.1 菌株與培養(yǎng)基
            1.2 主要儀器與設(shè)備
            1.3 試劑
        2 方法
            2.1 細(xì)菌總 DNA 模板的制備
            2.2 引物設(shè)計(jì)與合成
            2.3 PCR 擴(kuò)增
            2.4 Ⅰ類整合子基因盒插入?yún)^(qū) CS1 的測序
            2.5 Ⅰ型整合子-基因盒定位
        3 結(jié)果與分析
            3.1 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌 Ⅰ 類和 Ⅱ 類整合酶基因的檢測與分析
            3.2 qacE△ 1-sul1 基因的檢測與分析
            3.3 整合子基因盒插入?yún)^(qū) CS1 的分析
            3.4 菌株攜帶 Ⅰ 型整合子、耐藥基因盒與耐藥表型分析的關(guān)系
            3.5 Ⅰ 型整合子的定位
        4 分析與討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：2957930