本研究建立了牛奶中三聚氰胺、地昔尼爾、環(huán)丙氨嗪的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測法（HPLC-MS/MS）。用1%三氯乙酸-乙腈溶液將牛奶中的蛋白沉淀,將目標分析物提取出來,通過強陽離子固相萃取柱對目標分析物進行富集凈化后,最后用Waters超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對三聚氰胺、地昔尼爾、環(huán)丙氨嗪殘留含量進行標準檢測,色譜柱采用Acquity HSS T3（2.1mm×50mm,1.7μm）,以0.1%甲酸水溶液-乙腈為流動相進行梯度洗脫,外標法定量,并且對牛奶樣品的前處理方法及三聚氰胺、地昔尼爾、環(huán)丙氨嗪的液相色譜和質(zhì)譜條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明,本研究建立的牛奶中三聚氰胺、地昔尼爾、環(huán)丙氨嗪的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測法。三聚氰胺、地昔尼爾和環(huán)丙氨嗪的定性限分別為0.02、0.01、0.01 mg/kg,定量限分別為0.06、0.03、0.03 mg/kg,添加回收率在94%-104%之間,滿足殘留檢測方法的回收率在60%-120%的要求。該方法靈敏、穩(wěn)定,能同時對牛奶中三聚氰胺、地昔尼爾和環(huán)丙氨嗪進行定性、定量分析。此外,本研究還建立了羊組織和羊奶中地昔尼爾的間接性酶聯(lián)免疫吸附檢測法（En... 

【文章來源】：北京農(nóng)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

三聚氰胺、環(huán)丙胺嗪、地昔尼爾結(jié)構(gòu)式

2.3 結(jié)果與分析2.3.1 樣品處理條件的選擇2.3.1.1 提取溶劑的選擇已報道三聚氰胺提取液有稀鹽酸、20%二乙胺、磷酸鹽緩沖液(pH2)、1%三氯乙酸。由于地昔尼爾、環(huán)丙氨嗪與三聚氰胺的結(jié)構(gòu)非常接近，都具有三嗪母核，母核上氫被氨基取代，而呈現(xiàn)堿性，考慮到同時檢測三種化合物故選用 1%三氯乙酸-乙腈提取。2.3.1.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化采用兩步法對質(zhì)譜條件進行優(yōu)化，第一步在正離子模式下，以蠕動泵進樣的方式，對 1μg/mL的三聚氰胺、地昔尼爾和環(huán)丙氨嗪標準溶液進行母離子全掃描，確定三聚氰胺、地昔尼爾和環(huán)丙胺嗪的準分子離子量，第二步以三聚氰胺、地昔尼爾和環(huán)丙胺嗪三種藥物的準分子離子為母離子，對其子離子進行全掃描。本研究已代表性藥物地昔尼爾為例，采用兩步法對地昔尼爾的質(zhì)譜條件進行優(yōu)化，三聚氰胺和環(huán)丙氨嗪的操作方法與地昔尼爾的操作方法一致。

（波長 nm）圖 5 地昔尼爾，OVA 和地昔尼爾-OVA 的紫外掃描光譜圖Figure 5.Dicyclanil;OVA and Dicyclani-OVA UV scanning spectrogram..2 標準曲線及靈敏度和檢出限本研究建立的 ELISA 法是一種半定量的方法，它也是第一個在動物組織中檢測地昔尼爾用飽和硫酸銨沉淀法純化抗血清后，再用紫外光譜法測定，抗體濃度為 22mg /mL。包被選擇的抗體的最佳稀釋度分別為 1.0ng /mL 和 1：20000,在 9ng /mL 時，抗體對地昔尼爾的抑制濃度（IC50）的高度敏感性;校準抑制曲線為 y = 96.32-49.23log x（R2= 0.9712）（圖分別為 20％和 80％的較低和較高的抑制截止值，相應(yīng)的定量范圍是 2-35ng /mL。


本文編號：2945209