雞白痢沙門菌是當前危害我國養(yǎng)禽業(yè)的重要病原菌,每年均造成了較為嚴重的經(jīng)濟損失。《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》明確要求實施雞白痢凈化工程,養(yǎng)殖企業(yè)主要采取血清學診斷方法進行雞白痢的檢疫,淘汰陽性雞達到凈化雞群的目的。疫苗可作為凈化的輔助手段,其中減毒活疫苗與滅活疫苗和亞單位疫苗相比,不僅具有持久刺激機體產(chǎn)生體液免疫、細胞免疫和黏膜免疫應答的特點,還可以通過基因缺失策略設計為區(qū)分自然感染與疫苗免疫動物的DIVA疫苗,這對種群中雞白痢的凈化具有重要意義,顯示出廣闊的應用前景。我們在前期研究構建的雞白痢沙門菌aroA基因缺失株S004AaroA基礎上,運用λ-Red同源重組的方法進一步成功構建了雞白痢沙門菌spB、crp和rfaG基因的多基因缺失株,并通過對其生物學特性、致病性和免疫效力進行評價,篩選出較理想的減毒疫苗候選株,為進一步研發(fā)雞白痢沙門菌減毒疫苗奠定基礎。1.雞白痢沙門茵spB、crp和rfaG基因缺失株的構建及生物學特性的測定選擇與雞白痢沙門菌侵襲力和耐高滲能力相關的基因sipB、與菌毛表達相關的基因crp和與脂多糖合成相關的基因rfaG設計引物,以S00... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１沖５和ｃｒｐ基因的ＰＣＲ擴增??Ｆｉｇ．?１－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｓｉｐＢ?ａｎｄ?ｃｒｐ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｒ

缺失株在不添加葡萄糖的ＬＢ培養(yǎng)基中，生長速度較野生株減緩，且生長速度在??添加葡萄糖后得到回升，在葡萄糖濃度達到〇．〇５％后，可以達到和野生株Ｓ００４??相近水平（圖１－８？１０）。??１?ｇ??，?？?Ｓ００４??＾?Ｓ０（Ｍ＾ｃｒｐ＋ＬＢ??ｇ?１２＂?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．０１％Ｇ?ＬＢ??Ｉ?１?°＇?？＊？？釀?Ａｃｒｐ＋０?０５％Ｇ?ＬＢ??〇?Ｓ｛ＫＭ＾ｃｒｐ＋０，０８％Ｇ?Ｌ８??°?°６＇?—■夸?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．１％ＧＬＢ??°４＇?－ｍ－?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．５％Ｇ?ＬＢ??０．２．??０．０１ｊｊ?ｖｖ；＇＇？＇＃Ｌ－ｉ＂，ｖ－ＬＵ，ｖ＇ｖ＇ｉｒｎ?ｉｋｕｕｊ＂ｕ－ｉｉｊｕ；ｊａｖｒ．…－＊．．．．．．．．．．．．．?ｉ??＼??〇?２?４?Ｓ?８?１０?１２??Ｔｌｍａ／ｈ??圖ｌ－８Ｓ０

??圖１－１４?Ｓ００４Ａｗ＾ＡｃｒｐＡｒ／ａＧ和Ｓ００４Ａ＾＾４Ａ沖５Ａｒ／ａＧ基因缺失突變株傳代ＰＣＲ鑒定圖??Ｆｉｇ．?１－１４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＳＯＯＡＡａｒｏＡＡｓｉｐＢＡｒｆａＧ?ａｎｄ?Ｓ００４ＡａｒｏＡＡｃｒｐＡｒｆａＧ?ｇｅｎｅ??ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１，７：?Ｓ００４?ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ：?１２８４?ｂｐ??２？６：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ａｒｏｊ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｓ００４Ａａｒａ４ＡｃｒｐＡ吻Ｇ?７０－５０：?４４２?ｂｐ；??８？１２：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ａｒａｊ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ＳＯＣＭＡａ／＾＾Ａｓ＾＾Ａ／＾Ｇ１?坪從廣“＂０／７?／０－５０：?４４２ｂｐ??３．３．５上皮細胞的黏附與入侵試驗??當ＨｅＬａ細胞形成單層后，以１００ＭＯＩ的接種量接種野生株Ｓ００４和基因突??變株?Ｓ００４Ａａｒ〇ｙ４、Ｓ００４ＡａｒａＪＡ５７＞５、Ｓ００４ＡａｒｏＪＡｃｒｐ、ＳＣＫＭＡａｒａＪＡ＾ｂＳＡ響Ｇ??和Ｓ００４ＡａｒａＪＡｃｒ／７Ａｒ／ａａ進行上皮細胞的黏附與入侵試驗；與野生株Ｓ００４相??比，帶有＿５基因的缺失株黏附與入侵率均極顯著降低（Ｐ＜０．０１），?Ｓ００４ＡａｒｏＪ??單基因缺失株和Ｓ００４Ａａｒａ４Ａａｐ的黏附與侵入能力與野生株相比均無顯著差異??（？＞０．０５），?Ｓ００４／Ｗ？＾Ａｃｒ／？、Ｓ００４ＺＷｒｏｄＡｃｒ；７Ａｒ／ａＣ７?缺失株黏附的黏附率較野生??株下降了?５２．３２％


本文編號：2944652