發(fā)布時(shí)間：2020-12-28 16:02

　　瘤胃酸中毒是反芻動(dòng)物生產(chǎn)中常見的一種營(yíng)養(yǎng)代謝疾病,給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的損失。瘤胃酸中毒會(huì)引起瘤胃屏障結(jié)構(gòu)破壞、功能喪失,增加瘤胃內(nèi)有毒物質(zhì)進(jìn)入血液的途徑,進(jìn)而加重病癥引發(fā)全身性代謝型酸中毒,但其發(fā)生機(jī)制尚不清楚,有待深入研究。有研究發(fā)現(xiàn),瘤胃屏障結(jié)構(gòu)的破壞可能與瘤胃上皮細(xì)胞過度凋亡有關(guān)。高濃度乳酸是引起急性瘤胃酸中毒發(fā)生的主要因素。但乳酸是否能誘導(dǎo)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡還未見報(bào)道。煙酸是一種B族維生素,在緩解瘤胃酸中毒癥狀上有一定效果,但煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡是否具有保護(hù)作用尚不清楚。本試驗(yàn)采用成年湖羊瘤胃上皮細(xì)胞作為試驗(yàn)對(duì)象,通過體外培養(yǎng)法研究乳酸及煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞細(xì)胞活力、氧化還原狀態(tài)、線粒體膜電位、凋亡及相關(guān)基因和蛋白的影響,探討乳酸及煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制。通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,Annexin V FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,熒光顯微鏡觀察線粒體膜電位變化,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧及線粒體膜電位變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR及蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)分析細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。試驗(yàn)結(jié)果如下:（1）不同劑量抗生素處理對(duì)成年湖羊瘤胃上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)結(jié)果的影響。通... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文名詞對(duì)照表（Abbreviations）
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 研究背景
    2 研究進(jìn)展
        2.1 酸中毒對(duì)瘤胃上皮的影響
            2.1.1 乳酸在瘤胃中的代謝
            2.1.2 瘤胃乳酸酸中毒的發(fā)生機(jī)制
            2.1.3 瘤胃上皮的結(jié)構(gòu)和功能
            2.1.4 瘤胃酸中毒對(duì)瘤胃上皮的影響
        2.2 細(xì)胞凋亡對(duì)瘤胃上皮的影響
            2.2.1 細(xì)胞凋亡概況
            2.2.2 細(xì)胞凋亡的特征
            2.2.3 細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)因素
            2.2.4 細(xì)胞凋亡的機(jī)制
            2.2.5 凋亡對(duì)上皮屏障的影響
        2.3 煙酸在反芻動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用
            2.3.1 煙酸在瘤胃中的代謝
            2.3.2 煙酸對(duì)反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)的影響
            2.3.3 煙酸對(duì)瘤胃酸中毒的影響
        2.4 煙酸對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控
            2.4.1 DNA修復(fù)途徑
            2.4.2 抗氧化途徑
    3 研究目的和意義
    4 技術(shù)路線
第二部分 試驗(yàn)研究
    試驗(yàn)一 不同劑量抗生素處理對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)結(jié)果的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 組織來源
                1.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)液的配制
                1.1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組
            1.2 試驗(yàn)方法
                1.2.1 瘤胃上皮組織的清洗
                1.2.2 細(xì)胞分離與培養(yǎng)
                1.2.3 細(xì)胞的純化與傳代
                1.2.4 細(xì)胞免疫化學(xué)法鑒定
                1.2.5 細(xì)胞生長(zhǎng)活性檢測(cè)
        2 結(jié)果分析
            2.1 不同劑量抗生素處理對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞染菌及生長(zhǎng)的影響
            2.2 細(xì)胞的純化與傳代
            2.3 細(xì)胞的免疫化學(xué)鑒定
            2.4 細(xì)胞生長(zhǎng)活性檢測(cè)
        3 討論
        4 小結(jié)
    試驗(yàn)二 乳酸及添加煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞活力的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)基的配制
            1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組
            1.3 測(cè)定項(xiàng)目與方法
                1.3.1 MTT法檢測(cè)瘤胃上皮細(xì)胞活力
            1.4 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果分析
            2.1 不同濃度乳酸在不同時(shí)間對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞相對(duì)活力的影響
            2.2 不同濃度煙酸在乳酸處理下對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞相對(duì)活力的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
    試驗(yàn)三 乳酸及添加煙酸對(duì)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)及線粒體膜電位的影響
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)試劑與儀器
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)基的配制
            1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組
            1.3 測(cè)定項(xiàng)目和測(cè)定方法
                1.3.1 細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的測(cè)定
                1.3.2 細(xì)胞內(nèi)總抗氧化能力（Total-antioxidant capacity,T-AOC）的測(cè)定
                1.3.3 細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位檢測(cè)
            1.4 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 乳酸及添加煙酸處理對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生的影響
            2.2 乳酸及添加煙酸處理對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞內(nèi)總抗氧化能力的影響
            2.3 乳酸及添加煙酸處理對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
    試驗(yàn)四 乳酸及添加煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)試劑與儀器
                1.1.1 主要試劑
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)基的配制
            1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組
            1.3 測(cè)定項(xiàng)目和測(cè)定方法
                1.3.1 Annexin V FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
                1.3.2 RT-PCR檢測(cè)凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)
                1.3.3 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量的測(cè)定
            1.4 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 乳酸及添加煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡的影響
            2.2 乳酸及添加煙酸處理對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因及蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響
                2.2.1 乳酸及添加煙酸處理對(duì)Mct1、P53、PARP-1 mRNAs及蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響
                2.2.2 乳酸及添加煙酸處理對(duì)Bcl-2、Bax mRNAs及蛋白相對(duì)表達(dá)量及Bcl-2/Bax比值的影響
                2.2.3 乳酸及添加煙酸處理對(duì)Cyt-C、AIF、caspase-9 mRNAs及蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響
                2.2.4 乳酸及添加煙酸處理對(duì)Fas、caspase-8、caspase-3 mRNAs及蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響
        3 討論
            3.1 乳酸及添加煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡的影響
            3.2 乳酸及添加煙酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因及蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響
        4 小結(jié)
第三部分 全文結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)和展望
    1 全文結(jié)論
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
    3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]丁酸對(duì)瘤胃上皮細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響[J]. 彭志鵬,羅丹,許超,熊小文,溫慶琪,瞿明仁,歐陽(yáng)克蕙.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(03)
[2]過瘤胃煙酸對(duì)圍產(chǎn)期奶牛生產(chǎn)性能和脂肪代謝的影響[J]. 陳志遠(yuǎn),王劍飛,高健,彭志鵬.  中國(guó)奶牛. 2018(04)
[3]奶牛瘤胃上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 姜茂成,詹康,嚴(yán)康,趙倩明,趙國(guó)琦.  中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(01)
[4]基于Meta分析煙酸對(duì)奶牛血液酮體指標(biāo)的影響[J]. 陳志遠(yuǎn),李炎,王劍飛.  飼料廣角. 2017(08)
[5]高谷物日糧促進(jìn)山羊瘤胃上皮單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1及鈉鉀ATP酶mRNA的表達(dá)[J]. 劉軍花,朱偉云,毛勝勇.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2017(02)
[6]成年牛瘤胃上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)方法研究[J]. 余燕,李元曉,李旺,丁軻,李東平,王小芳,曹志軍,李勝利.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(05)
[7]乳酸抑制腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的仔豬空腸上皮細(xì)胞凋亡初探[J]. 陸相嵩,任曉明.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2015(11)
[8]乳酸堆積和二氯乙酸鈉對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡及bax、bcl-2表達(dá)和caspase-3活性的影響[J]. 胡光榮,王天群,賈廣生,何永捍,孫輝,張德新,王新春,王洪亮,于凱江.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2014(24)
[9]中國(guó)馴鹿瘤胃上皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)[J]. 范燕茹,王佩,金鑫,王冠玉,邱凱,王秀芳,蘇日古格,余興邦,楊銀鳳.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2014(11)
[10]高精料飼糧中添加煙酸對(duì)體外瘤胃發(fā)酵培養(yǎng)液pH及發(fā)酵參數(shù)動(dòng)態(tài)變化的影響[J]. 歐陽(yáng)克蕙,張琪,魯友友,瞿明仁,熊小文,潘珂.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2014(01)

博士論文
[1]亞急性瘤胃酸中毒對(duì)山羊瘤胃上皮屏障功能的影響及其機(jī)制[D]. 劉軍花.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]飼喂不同日糧奶牛瘤胃發(fā)酵和VFA吸收特性及其相關(guān)基因表達(dá)的研究[D]. 翁秀秀.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]PSAP誘導(dǎo)獨(dú)特的不依賴于Bcl-2家族蛋白的線粒體凋亡途徑[D]. 李婷.吉林大學(xué) 2012

碩士論文
[1]煙酸調(diào)控高精料誘導(dǎo)瘤胃上皮細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D]. 許超.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]高乳酸通過線粒體通路損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 郭永真.寧夏醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]亞急性瘤胃酸中毒對(duì)奶山羊瘤胃上皮通透性及細(xì)胞連接蛋白表達(dá)的影響[D]. 程萌.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]煙酸對(duì)玉米和苜蓿瘤胃培養(yǎng)液氧化還原態(tài)及發(fā)酵指標(biāo)的影響[D]. 陳偉.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[5]亞急性瘤胃酸中毒對(duì)奶山羊瘤胃上皮屏障功能影響機(jī)制的研究[D]. 楊淑青.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]亞急性瘤胃酸中毒對(duì)瘤胃、瓣胃上皮細(xì)胞增殖與凋亡的影響[D]. 鄔宇航.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[7]乳酸抑制LPS激活大鼠腸黏膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB通路的研究[D]. 劉靜.北京農(nóng)學(xué)院 2011
[8]醋酸和乳酸對(duì)酵母細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的影響研究[D]. 盧麗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2944030